土壤几丁质酶（S-Chitinase）检测试剂盒 返回列表页

土壤几丁质酶（S-Chitinase）检测试剂盒说明书，注意：正式测定之前选择2-3 个预期差异大的样本做预测定。

测定意义：

几丁质主要存在于虾、蟹、昆虫等甲壳类动物的外壳与软体动物的器官(例如乌贼的软骨)， 以及真菌类的细胞壁中，而几丁质酶(EC 3.2.1.14)可催化几丁质水解，具有抵御真菌侵染的作用，成为抗真菌病害的研究热点。

测定原理：

几丁质酶水解几丁质产生 N-乙酰氨基葡萄糖，进一步与对二甲氨基苯jia醛产生红色化合物，在 544nm 处有特征吸收峰，吸光值增加速率反映了几丁质酶的活性。

自备实验用品及仪器：

天平、水浴锅、离心机、震荡仪、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板， 甲苯、蒸馏水。

土壤几丁质酶（S-Chitinase）检测试剂盒试剂组成和配制：

试剂一：液体 10mL×1 瓶，4℃保存。试剂二：液体 4mL×1 瓶，4℃保存。

试剂三：液体 65mL×1 瓶，4℃避光保存。

样品处理：

新鲜土样风干，过 30-50 目筛。

测定操作表：

土壤几丁质酶（S-Chitinase）检测试剂盒计算公式：

a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下

标准曲线：y=5.2714x-0.0007，R2=0.9989；x 为标准品浓度（mg/mL），y 为吸光值Δ A。

酶活性定义：37℃条件下，每克土壤每天分解几丁质产生 1μ g N-乙酰氨基葡萄糖的酶量为一个酶活性单位。
土壤几丁质酶活性（μ g/d/g 土样）=（Δ A +0.0007）÷5.2714×V 反总÷W÷T×1000
= 598×（Δ A +0.0007）
V反总：反应体系总体积，0.315mL；W：样本质量，0.1g；T：反应时间，1d；1000：1mg/mL=1000μ  g/mL

b. 用 96 孔板测定的计算公式如下
标准曲线：y=2.6357x-0.0007，R2=0.9989；x 为标准品浓度（μ  g/mL），y 为吸光值Δ A。
酶活性定义：37℃条件下，每克土壤每天分解几丁质产生 1μ g N-乙酰氨基葡萄糖的酶量为一个酶活性单位。
土壤几丁质酶活性（μ g/d/g 土样）=（Δ A +0.0007）÷2.6357×V 反总÷W÷T×1000
= 1195×（Δ A +0.0007）
V反总：反应体系总体积，0.315mL；W：样本质量，0.1g；T：反应时间，1d；1000：1mg/mL=1000μ  g/mL

土壤几丁质酶（S-Chitinase）检测试剂盒注意事项：
试剂一充分混匀后再使用。