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| 规格 | 50T/100T | 仪器 | 分光光光度计/酶标仪 |
|---|---|---|---|
| 运输 | 常温 | 保质期 | 三个月 |
| 品牌 | 合肥莱尔生物科技有限公司 | 订购方式 | 联系客服 |
| 保存 | 按说明书 | 货期 | 现货 |
土壤亚硝酸还原酶（S-NiR）检测试剂盒说明书，注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义：
土壤亚硝酸还原酶是反硝化作用中的关键酶之一，参与亚硝酸盐至 NO 的还原反应，它的活性反映了生物降解过程中氮素的转化效率，为氮素转化规律的研究提供一定的依据。
测定原理：
亚硝酸还原酶可将 NO2—还原为 NO，使样品中参与重氮化反应生成紫红色化合物的 NO2—减少，即 540nm 处吸光值的变化可反应土壤中亚硝酸还原酶的活性。
自备实验用品及仪器：
天平、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板、水浴锅、低温离心机。
土壤亚硝酸还原酶（S-NiR）检测试剂盒试剂的组成和配制：
试剂一：液体 4mL×1 瓶，4℃保存。
试剂二：粉剂×1 瓶，4℃保存。临用前加 4mL 蒸馏水溶解。
试剂三：液体 4mL×1 瓶，4℃保存。（如出现沉淀可以 70-80℃加热溶解）
试剂四：液体 10mL×1 瓶，4℃避光保存。（如出现沉淀可以 70-80℃加热溶解） 试剂五：液体 10mL×1 瓶，4℃避光保存。
工作液：临用前根据用量将试剂四和试剂五以 1:1 的比例混合。
样品处理：
新鲜土样自然风干或 37 度烘箱风干，过 30~50 目筛。
测定操作表：
| 空白管 | 对照管 | 测定管 |
风干土样（g） |
| 0.02 | 0.02 |
蒸馏水（μ L） |
| 40 |
|
试剂一（μ L） | 40 |
| 40 |
试剂二（μ L） | 40 | 40 | 40 |
混匀后，25℃反应 1h | |||
试剂三（μ L） | 40 | 40 | 40 |
充分震荡 30S，10000rpm，4℃，离心 10min | |||
上清液（μ L） | 70 | 70 | 70 |
工作液（μ L） | 140 | 140 | 140 |
充分混匀，测定 540nm 各管吸光值，分别记为 A 空白管、A 对照管、A 测定管。空白管只要做一管，每个测定管需设一个对 照管。 | |||
土壤亚硝酸还原酶（S-NiR）检测试剂盒计算公式：
a. 使用微量石英比色皿测定的计算公式如下
标准曲线：y = 1.5562x+ 0.0088，R2 = 0.996；x 为标准品浓度（μ mol/mL），y 为吸光值（A标准管-A 空白管）。
酶活单位定义：每g 土样每天还原 1μ mol NO2ˉ 的量为一个酶活力单位。
S-NiR（μ mol /d /g 土样）=[A 空白管-(A 测定管-A 对照管) -0.0088]÷1.5562×V 标÷W÷T
= 0.617×[A 空白管-(A 测定管-A 对照管) -0.0088]÷W
T：反应时间，1h=1/24d；V 标：标准液体积，0.04mL；W：样本质量，g。
b. 使用 96 孔板测定的计算公式如下
标准曲线：y = 0.7781x+ 0.0088，R2 = 0.996；x 为标准品浓度（μ mol/mL），y 为吸光值（A标准管-A 空白管）。
酶活单位定义：每g 土样每天还原 1μ mol NO2ˉ 的量为一个酶活力单位。
S-NiR（μ mol /d /g 土样）=[A 空白管-(A 测定管-A 对照管) -0.0088]÷0.7781×V 标÷W÷T
= 1.234×[A 空白管-(A 测定管-A 对照管) -0.0088]÷W
T：反应时间，1h=1/24d；V 标：标准液体积，0.04mL； W：样本质量，g。
注意事项：
1. 配制好的工作液 3 天内使用完。
2. 若吸光值超过 1.5，将上清液进行适当的稀释后再加入工作液显色，并在计算公式中乘以稀释倍数。
3. 严格控制显色时间，否则会对结果有影响。
4. 标准曲线线性范围为 0.03μ mol/mL-1.5μ mol/mL。
土壤亚硝酸还原酶（S-NiR）检测试剂盒A 空白管-（A 测定管-A 对照管）线性范围为 0.02-1.5。
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