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规格 | 50T/100T | 仪器 | 分光光光度计/酶标仪 |
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运输 | 常温 | 保质期 | 三个月 |
品牌 | 合肥莱尔生物科技有限公司 | 订购方式 | 联系客服 |
保存 | 按说明书 | 货期 | 现货 |
土壤β-葡萄糖苷酶检测试剂盒说明书,正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定
测定意义:
S-β -GC 能够催化水解芳基或烃基与糖基原子团之间的糖苷键生成葡萄糖,是纤维素分解酶系中重要组成成分之一,在土壤微生物的糖类代谢方面具有重要生理功能。
测定原理:
S-β -GC 能够催化对-硝基苯-β -D 吡喃葡萄糖苷生成对-硝基苯酚,后者在 400nm 有特征光吸收。
自备实验用品及仪器:
可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、甲苯(不允许快递)和蒸馏水。
土壤β-葡萄糖苷酶检测试剂盒试剂组成和配制:
试剂一:甲苯 5mL×1 瓶,4℃保存;(自备)
试剂二:粉剂×1 瓶,-20℃保存;临用前加入 10mL 蒸馏水,充分溶解备用,用不完的试剂仍-20℃保存;
试剂三:液体 20mL×1 瓶,4℃保存; 试剂四:液体 15mL×1 瓶,4℃保存;
样品处理:
新鲜土样自然风干或 37 度烘箱风干,过 30~50 目筛。
测定步骤:
1、分光光度计或酶标仪预热 30min 以上,调节波长至 400nm,蒸馏水调零。
2、加样表
试剂名称 | 测定管 | 对照管 |
风干土样(g) | 0.02 | 0.02 |
试剂一(μ L) | 10 | 10 |
| 室温振荡混匀 15min | 90℃振荡混匀 15min |
试剂二(μ L) | 130 |
|
蒸馏水 |
| 130 |
试剂三(μ L) | 160 | 160 |
混匀, 37℃振荡反应 1h 后,90℃水浴 5min(盖紧,防止水分散失),流水冷却, 10000g 25℃离心 10min,取上清液(在 EP 管或 96 孔板中加入下列试剂)
上清液(μ L) | 70 | 70 |
试剂四(μ L) | 130 | 130 |
土壤β-葡萄糖苷酶检测试剂盒充分混匀,室温静置 2min 后, 400nm 处测定吸光值A,计算Δ A=A 测定管-A 对照管。每个测定管设一个对照管。
S-β-GC 活力计算:
a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下
标准条件下测定的回归方程为 y = 0.0032x -0.0027;x 为标准品浓度(μ mol/L),y 为吸光值。
单位的定义:每天每g 土样中产生 1 μ mol 对-硝基苯酚定义为一个酶活力单位。
S-β -GC 活 力 ( μ mol/d/g 土 样 ) = (Δ A+0.0027) ÷0.0032×V 反 总 ÷W÷T
=112.5×(Δ A+0.0027)
T:反应时间,1h=1/24d; V 反总:反应体系总体积:3×10-4 L;W:样本质量,0.02g。b.用 96 孔板测定的计算公式如下
标准条件下测定的回归方程为 y = 0.0016x -0.0027;x 为标准品浓度(μ mol/L),y 为吸光值。
单位的定义:每天每g 土样中产生 1 μ mol 对-硝基苯酚定义为一个酶活力单位。
S-β -GC 活 力 ( μ mol/d/g 土 样 ) = (Δ A+0.0027) ÷0.0016×V 反 总 ÷W÷T
=225×(Δ A+0.0027)
土壤β-葡萄糖苷酶检测试剂盒T:反应时间,1h=1/24d; V 反总:反应体系总体积:3×10-4 L;W:样本质量,0.02g。
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