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土壤酸性磷酸酶（S-ACP）检测试剂盒

注意：正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。

测定意义：

土壤磷酸酶是一类催化土壤有机磷矿化的酶，其活性的高低直接影响着土壤中有机磷的分解转化及其生物有效性，是评价土壤磷素生物转化方向与强度的指标。土壤磷酸酶受到土壤碳、氮含量、有效磷含量和 pH 显著影响，根据最适 pH 范围，通常分为酸性、中性和碱性三种类型。

测定原理：

酸性环境中，S-ACP 催化磷酸苯二钠水解生成苯酚和磷酸氢二钠，通过测定酚的生成量即可计算出S-ACP 活性。

自备实验用品及仪器：

可见分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96 孔板、台式离心机、37℃恒温培养箱、分析天平、可调式移液器、冰、蒸馏水、乙醇和甲苯。

试剂组成和配制：

试剂一：液体×1 瓶，4℃避光保存。

试剂二：粉剂×1 瓶，4℃保存。用前加 100mL 蒸馏水充分溶解。试剂三：液体×1 瓶，4℃保存。

试剂四：粉剂×1 支，4℃避光保存。临用前加 576 μ  L 无水乙醇（自备），24 μ  L 蒸馏水充分溶解。（变褐色后不能再使用）

标准品：液体×1 支，0.5μ mol/mL 苯酚标准液，4℃保存。

土壤酸性磷酸酶（S-ACP）检测试剂盒粗酶液提取：

称取风干混匀土壤约 0.1g，加入 50μ  L 甲苯（自备），轻摇 15min；加 0.4 mL 试剂一并且摇匀后，置于 37℃恒温培养箱，开始计时，催化反应 24h；到时后迅速加入 1mL 试剂二充分混匀，以终止酶催化的反应。8000g，25℃离心 10min，取上清液置于冰上待测。

测定步骤：

1. 分光光度计/酶标仪预热 30 min 以上，调节波长到 660 nm，蒸馏水调零。

2. 空白管：取微量玻璃比色皿/酶标板，加入 10μ L 蒸馏水，20μ L 试剂三，4μ L 试剂四，充分混匀，显色后再加蒸馏水 166μ L，混匀后 25℃静置 30 min，于 660 nm 测定吸光度，记为 A 空白管。

3. 标准管：取微量玻璃比色皿/酶标板，加入 10μ L 标准液，20μ L 试剂三，4μ L 试剂四，充分混匀，显色后再加蒸馏水 166μ L，混匀后 25℃静置 30 min，于 660 nm 测定吸光度，记为 A 标准管。

4. 测定管：取微量玻璃比色皿/酶标板，加入 10μ L 上清液，20μ L 试剂三，4μ L 试剂四，充分混匀，显色后再加蒸馏水 166μ L，混匀后 25℃静置 30 min，于 660 nm 测定吸光度，记为 A 测定管。

土壤酸性磷酸酶（S-ACP）检测试剂盒注意：空白管和标准管只需测定一次。

S-ACP 活性计算公式：

活性单位定义：37℃中每克土壤每天释放 1μ mol 酚为 1 个酶活单位。

S-ACP（μ mol/d /g 土样）=[C 标准液×(A 测定管－A 空白管)÷(A 标准管－A 空白管)]×V 总

÷W÷T ÷1000

=0.725×(A 测定管－A 空白管)÷(A 标准管－A 空白管)÷W

C 标准液：0.5 μ mol/mL； V 总：催化体系总体积，1.45mL；W：土壤样品质量，g；T：催化反应时间，24h=1 d。土壤酸性磷酸酶（S-ACP）检测试剂盒