气相色谱内标法定量

1.熟悉相对校正因子定义以及求取方法

2.掌握内标法定量公式及其应用

3.熟悉氢火焰监测器的特点和使用方法

（二）、实验原理

气相色谱法是以气体(此气体称为载气)为流动相的柱色谱分离技术。其原理是利用被分离分析的物质(组分)在色谱柱中的气相(载气)和固定(液)相之间分配系数的差异，在两相作相对运动时，在两相间作反复多次(10³～10⁶次)的分配，使得原来的微小差别变大，从而使各组分达到分离的目的。

根据色谱图进行组分的定量时，所用定量方法主要有归一化法，内标法和外标法三种。当试样组分不能全部从色谱柱流出，或有些组分在检则器上没有信号时，就不能使用归一化法，这时可用内标法。

内标法是气相色谱所常用的一种比较准确的定量方法。当样品中的所有组分因各种原因不能全部流出色谱柱，或监测器不能对各组分都有响应，或只需测定样品中某几个组分时，可采用内标法定量。内标法的基本过程是:准确称取质量为W_m的样品，加入质量为W_s的内标物，用溶剂配成一定浓度的溶液，进行气相色谱分析，然后根据被测物和内标物的质量及其在色谱图上的峰面积比，求出被测组分的含量，计算公式如下：

式中Pi为组分i的百分含量；Ai, As分别是被测组分和内标物的峰面积； f _i、fs分别是被测组分和内标物的重量校正因子二者之比（fi / fs ）可由标准样品按照上述方法进行测试并计算得。

内标法必须由合适的内标物，基本条件是：它在样品中不存在、无化学反应、稳定、性质尽量与被测组分接近，能与样品要互溶、色谱峰能*分离并比较接近被测组分的色谱峰。内标物的量也应与被测组分的量相当，以提高定量分析的准确度。

内标法不需要被测样品中的所有的组分从色谱柱*流出或被监测器检测出，不象归一化法存在使用上的限制；它采用了相对校正因子，使仪器和操作条件对分析结果的影响得到校正。但对内标选择的条件比较苛刻，多了一个内标物增加了分离的要求。

（三）、仪器与试剂

仪器: 安捷伦6890N气相色谱仪；氢火焰离子化检测器；

色谱柱：HP-5M5I毛细管柱（30m×0.25mm×0.25mm）。

试剂: 氢气、氮气、压缩空气；

氯仿（分析纯）

二氯苯、二甲苯标样；

内标物分别为氯苯、甲苯；

含上述成分未知样品①、②。

（四）、实验内容与步骤

  一、准备与开机

1 打开主机箱门，在进样口和检测器间安装HP-5M5I毛细管柱。

2 打开氮气、空气和氢气开关。

3 打开计算机电源开关，打开GC电源开关。

4 双击桌面上的Instrument online 图标进入工作站系统。

二、样品分析与采集数据

1 在Method and Runcontrol界面上选择File → Load → Method，选择分析方法文件。也可以选择Method → Edit Method进行参数修改。

进样口：温度270℃，分流比10：1

色谱柱：HP-5M5I毛细管柱（30m×0.25mm×0.25mm）,柱内流量为1.5ml/min

柱温：35℃（3min）             80℃            150 ℃（2min）            

检测器：温度270℃，氢气流量为30ml/min，空气为300ml/min

2 手动进样：在Method and Runcontrol界面上选择 Runcontrol→Sample Information，依提示输入保存路径、文件名称、样品名称、操作者等信息，进样时同时按GC面板上的Start键，即开始样品分析与数据采集。

3 样品分析：用微量注射器分别移取上述标样、样品各0.5μl进样分析，各重复三次。

三、报告输出

1 在Instrument offline 主界面上选择View → Data Analysis，进入界面。

2 选择所要处理的数据文件。

3 选择所要选用的报告格式，输出报告。

四、关机

1 待气化室及检测器稳定降到150℃以下、柱温降到接近室温，方可关机。

2 在Instrument Online 主界面上退出色谱工作站。

3 依次关闭GC电源，计算机电源。

4 关闭气源和总电源。

五、注意事项

1.必须先通入载气，再开电源，实验结束时应先关掉电源，再关载气。

2.本气相色谱仪检测器采用起动点火装置，在点火后哟阿检查氢火焰是否已经点燃，若未能成功点燃，须在Edit Method →Dector下点击Reignite进行重新点火。

3.在进样之前，必须修改文件的路径，否则会冲毁上次的分析结果。

4.确保每次移取样品的体积相同；进样要用手护住注射器的金属针部分，迅速、垂直向下，确保样品在气化室中瞬间气化，以免将其扭曲甚至折断。

5.切忌将大量氢气排入室内。

6.注意气瓶温度不要超过40℃，在2米以内不得有明火。使用完毕，立即关闭氢气钢瓶的气阀。

六、数据处理

1.确定样品中测定组分的色谱峰位置

2.计算校正系数fi / fs

3.计算样品中测定的各组分的含量及数据的偏差。

附：气相色谱仪简介

气相色谱仪典型流程图

气相色谱仪虽然种类很多，形式也各不一样，但主要由四部分组成：

1.气源和流量调节系统: 用于保证载气处于最佳工作状态

2.分离系统: 色谱进样汽化器和色谱柱

3.检测系统: 用于测定柱后流出组分的浓度(或质量)随时间的变化

4.其它辅助系统: 包括温控系统,数据处理系统和样品收集器等