K-TDFR-200A总膳食纤维检测试剂盒中文说明书

1. 简介： 

膳食纤维是指碳水化合物及其相类似物质的总和，包括多糖、寡糖、木质素以及相关的植物物质。主要有纤维素、半纤维素、果胶及亲水胶体物质，如树胶、海藻多糖等组分；另外还包括植物细胞壁中所含有的木质素；不被人体消化酶所分解的物质，如抗性淀粉、抗性糊精、抗性低聚糖、改性纤维素、黏质、寡糖以及少量相关成分，如蜡纸、角质、软木脂等。 总膳食纤维检测试剂盒是根据AOAC991.43，AOAC 985.29，AACC32-07和AACC 32-05方法开发的，也适用于其它方法，如AACC Method 32-21，AACC method32-06。
2. 检测原理 :

脱脂（如大于10%）干燥后的样品经热稳定a-淀粉酶、蛋白酶和淀粉葡萄糖苷酶酶解消化，酶解液通过乙醇沉淀、过滤，乙醇和丙酮洗涤残渣后干燥、称重，得到总膳食纤维（TDF）残渣； 酶解液通过直接过滤、热水洗涤残渣，干燥后称重，得到不溶性膳食纤维（IDF）残渣； 滤液用乙醇沉淀，过滤、干燥、称重，得到可溶性膳食纤维（SDF）残渣。 TDF、IDF和SDF的残渣扣除蛋白质、灰分和空白即得TDF、IDF和SDF含量。 该检测试剂盒的主要优势在于直接提供高纯度的酶，酶的活力是标准化的，而标准化的a-淀粉酶的活力在测量抗性淀粉是*的。 淀粉葡萄糖苷酶中基本没有纤维素酶，而其他常用的酶制剂中常含有这种污染物，这将导致溶解和低估β-葡聚糖。 该试剂盒提供的酶都是稳定的液体，可以保存到试剂盒有效期，并且是直接应用液，不需要使用前再溶解。 
3. 用途:

适用于检测谷物、水果、蔬菜和加工食品中的总膳食纤维（TDF）、不溶性 膳食纤维（IDF）和可溶性膳食纤维（SDF）的检测。
4. 提供试剂及材料:

每一个盒中的提供的酶试剂足够进行200个试验，如另外需要可单独订货： Bottle 1 ，1瓶： 热稳定a-淀粉酶（20mL，~ 3,000 U/mL，Ceralpha method；~ 10,000 U/mL on soluble starch。). Bottle 2，1瓶： 纯化的蛋白酶(20mL，50 mg/mL; ~ 350 tyrosine Units/mL。) Bottle 3，2瓶: 淀粉葡萄糖苷酶(20mL，3300 U/mL on soluble starch。) 总计：80ml（4瓶20ml包装） 另外，实验中需要用到硅藻土： 酸洗硅藻土Celite?545，100g或500g包装，（货号：G-CEL100，G-CEL500) 其他相关试剂盒：

膳食纤维质控试剂盒（货号：K-TSCK） 质控试剂盒用于检验酶的效力和纯度，含下表中所列物质每种一瓶，并附有技术数据单(K-TSCK)，盒中每种物质足够10次测试用。 

品种 数量 β-葡聚糖（大麦） 1.0g 高直链玉米淀粉 10.0g 淀粉（小麦） 10.0g 酪蛋白 5.0g 果胶 1.0g 5. 需要的设备和试剂 

5.1 设备 

A. 高型无导流口烧杯：400mL或600mL 

B. 坩埚：具粗面烧结玻璃板，孔径40-60 μm。清洗后在马福炉中525℃灰化6小时或过夜，用真空泵除去硅藻土和灰分，室温下用2%清洗液浸泡1小时，用水和蒸馏水冲洗干净，用15 mL丙酮冲洗后风干，加1g硅藻土到干燥的坩埚中，在130℃干燥至恒重，在干燥器中冷却1小时，记下坩埚（包括硅藻土）的重量。 

C. 真空溶剂过滤装置：真空泵或有调节装置的抽吸器，1L的抽滤瓶，侧壁有抽滤口，以及抽滤瓶配套的橡胶塞。用于酶解液的抽滤。 

D. 恒温振荡水浴：95-100℃ 

E. 分析天平：感量0.1mg 

F. 天平（台秤）：4 000g量程，感量0.1g 

G. 马福炉：525±5°C， 

H. 烘箱：103±2℃，130±3℃ 

I. 真空干燥箱 

J. 干燥器：二氧化硅或等同干燥剂 

K. PH计，具有温度补偿功能。 

L. 微量凯氏定氮仪。 

M. 移液器，50-200 μL，5 mL，一次性移液吸头。 

N. 计时器。 

O. 橡胶刮勺 

P. 磁力搅拌器 

5.2 试剂 

A. 95%乙醇（体积比），

B. 78 %乙醇：取821mL95%乙醇置于容量瓶中，用水稀释到刻度，混匀。

C. 丙酮 

D. 蒸馏水或去离子水 

E. 清洗液Micro (International Products Corp.,Trenton,NJ).，配成2%液体 

F. MES/TRIS缓冲液（0.05mol/L）:称取19.52g (MES) (Sigma, M 8250)和14.2 g (TRIS) (Sigma,T1503)