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绵羊非酯化脂肪酸(NEFA)ELISA试剂盒

英文简称：Sheep non-esterified fatty acid (NEFA) ELISA Kit

产品货号：KS17547

品牌名称：科顺生物 

产品规格：96T/48T

运输方式：快递(根据客户要求，选择具体的运输方式)

产品价格：*，欢迎在线留言洽谈！

使用范围：仅供科研检测,不得用于临床.

绵羊非酯化脂肪酸(NEFA)ELISA试剂盒实验原理：

本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中小鼠胰岛素（INS）水平。用纯化的小鼠胰岛素（INS）捕获抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被的微孔中依次加入小鼠胰岛素（INS），再与HRP标记的检测抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过*洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成终的黄色。颜色的深浅和样品中的小鼠胰岛素（INS）呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中小鼠胰岛素（INS）含量。

绵羊非酯化脂肪酸(NEFA)ELISA试剂盒组成：

试剂盒组成 48孔配置 96孔配置 保存

说明书 1份 1份

封板膜 2片 2片

密封袋 1个 1个

酶标包被板 1×48 1×96 2-8℃保存

标准品 0.3ml×6管 0.3ml×6管 2-8℃保存

酶标试剂 5 ml×1瓶 10 ml×1瓶 2-8℃保存

样品稀释液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶 2-8℃保存

显色剂A液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶 2-8℃保存

显色剂B液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶 2-8℃保存

终止液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶 2-8℃保存

20×浓缩洗涤液 15ml×1瓶 25ml×1瓶 2-8℃保存

注：标准品浓度依次为：40、20、10、5、2.5、0 mIU/L.

绵羊非酯化脂肪酸(NEFA)ELISA试剂盒样本处理及要求：

1. 血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。

2. 血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。

3. 尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。

4. 细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

5. 组织标本：切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。

6. 标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融.

7. 不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。

绵羊非酯化脂肪酸(NEFA)ELISA试剂盒操作步骤

1.标准品的加样：设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；。

2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。

3.加酶：每孔加入酶标试剂100μl，空白孔除外。

4.温育：用封板膜封板后置37℃温育60分钟。

5.配液：将20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释后备用。

6.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。

7.显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟. 

8.终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。

9.测定：以空白孔调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。

绵羊非酯化脂肪酸(NEFA)ELISA试剂盒注意事项：

1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。

2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。

3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间zuei好控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。

4．请每次测定的同时做标准曲线，zuei好做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于标准品孔*孔的OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时请后乘以总稀释倍数（×n×5）。

5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

6．底物请避光保存。

7．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.

8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

9．本试剂不同批号组分不得混用。

10. 如与英文说明书有异，以英文说明书为准。

计算：

以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，    

在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD      

值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释      

倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标      

准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值      

代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释      

倍数，即为样品的实际浓度。                  

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