点击化学“DBCO/TCO/TZ”在中药活性成分靶点鉴定中的特点及方法

近年来，基于在结构性、功能多样性以及生物相容性等方面具有的特点，源于中药活性成分的科研已在临床应用于，如性、心和恶性等，在新药及临床用药中占据重要[2]。其中中药活性成分的靶点研究是重要环节。中药活性分子与细胞内靶标相互作用，是其发挥功效的基础，明确其体内作用靶点，有助于药理机制的阐明及副作用的尽早发现，进而指导科研化学工作者在分子结构上进行针对性的优化改造，有利于科研的性及性，推动中药的化与现代化。主要综述了近年来点击化学（click chemistry）在中药活性成分靶点鉴定应用方面的研究进展。

1.“点击化学”在中药活性成分靶点鉴定中的特点

截至目前，小分子亲和色谱（small molecule affinity chromatography）及基于活性组分析（activity-based protein profiling，ABPP）是应用的中药活性成分及其他产物靶点鉴定中的常用策略。“

靶点钩钓”是基于小分子亲和色谱法的常用方法，是指基于科研分子可与发生共价结合的原理，将科研分子通过化学反应连接到生物相容的惰性树脂（磁珠或琼脂糖凝胶）上，基于该树脂来钓取能与科研分子发生相互作用的，后经凝胶电泳分离纯化，高分辨质谱分析，进而确定该科研分子的靶蛋白。利用该，一系列中药活性成分的靶点被成功鉴定，例如，Tu课题组分别构建了苏木酮A探针[10]及野菊花内酯探针[11]，依次鉴定出苏木酮A的作用靶点为肌苷5-磷酸脱氢酶2（IMPDH2），菊花内酯发挥作用的靶点蛋白为热休克蛋白70（HSP70），从靶点源头上揭示了中药活性成分的作用机制。

“靶点钩钓”策略是一种可操作性强的靶点鉴定，有力推动了中药药理机制的阐明，加快了中药现代化进程。该策略使用过程中如需引入位阻较大的亲和标签，则可能导致化合物的活性降低甚至丧失。随着生物正交化学反应的发展，由Sharpless于2001年提出的铜催化的叠氮-炔点击反应（click reaction）使这一问题得到了缓解，成为近年来应用、研究的基于活性组分析的靶点鉴定策略之一。

点击化学又称“链接化学”或“动态组合化学”，旨在通过小单元的拼接，来、地完成类型分子的化学合成。该反应强调开辟以碳-杂原子键（C-X-C）合成为基础的组合化学新方法，其反应为铜催化的叠氮-炔基的环加成反应。点击化学反应有如下特点：

（1）可在细胞内发生，利于原位直接找到科研作用靶点；

（2）合成反应、副产物对细胞害；

（3）操作简单、条件温和、对水与氧等环境不敏感。科学家们通过有机合成的方式在活性分子上引入炔烃等生物正交基团，在不影响其药理活性的前提下合成得到功能化衍生物，随后将该功能化衍生物与细胞共孵育，使其与靶标蛋白结合，后利用点击反应再将叠氮修饰的报告基团（或荧光）连接到探针-靶标蛋白复合物上，进而对靶标进行检测、富集和鉴定（图1）。

 2.基于点击化学进行靶点鉴定的具体步骤与方法

采用点击化学的方式进行靶点鉴定，通常需要3个步骤，具体包括：

（1）小分子探针的设计与合成，随后将该探针与细胞共孵育后实现与靶蛋白的某些位点发生共价结合；

（2）通过点击化学反应，将已与靶蛋白发生共价结合的分子探针与报告基团相连（图2）；

（3）对所识别的靶标进行纯化、富集和鉴定。

DBCO-PEG衍生物产品：

DBCO-PEG-Streptavidins 二苯基环辛炔-聚乙二醇-链霉亲和素

DBCO-PEG-Heparin 二苯基环辛炔-聚乙二醇-肝素

DBCO-PEG-Concanavalin A 二苯基环辛炔-聚乙二醇-刀豆球蛋白

DBCO-PEG-Catalase 二苯基环辛炔-聚乙二醇-过氧化氢酶

DBCO-PEG-Insulin 二苯基环辛炔-聚乙二醇-胰岛素

DBCO-PEG-Casein 二苯基环辛炔-聚乙二醇-络蛋白

DBCO-PEG-Ovalbumin 二苯基环辛炔-聚乙二醇-卵清蛋白

DBCO-PEG-Lectins 二苯基环辛炔-聚乙二醇-凝集素

DBCO-PEG-Dextran 二苯基环辛炔-聚乙二醇-葡聚糖

DBCO-PEG-DEX 二苯基环辛炔-聚乙二醇-葡聚糖

DBCO-PEG-alginate 二苯基环辛炔-聚乙二醇-海藻酸钠

DBCO-PEG-Chitosan 二苯基环辛炔-聚乙二醇-壳聚糖

DBCO-PEG-Cs 二苯基环辛炔-聚乙二醇-壳聚糖

DBCO-PEG-galactose 二苯基环辛炔-聚乙二醇-半乳糖

DBCO-PEG-mannose 二苯基环辛炔-聚乙二醇-甘露糖

DBCO-PEG-Glucose 二苯基环辛炔-聚乙二醇-葡萄糖

DBCO-PEG-Cellobiose 二苯基环辛炔-聚乙二醇-纤维二糖

DBCO-PEG-Lentinan 二苯基环辛炔-聚乙二醇-香菇多糖

DBCO-PEG-HRP 二苯基环辛炔-聚乙二醇-辣根过氧化氢酶

DBCO-PEG-MTX 二苯基环辛炔-聚乙二醇-甲氨蝶呤

DBCO-PEG-PTX 二苯基环辛炔-聚乙二醇-紫杉醇

DBCO-PEG-Doxorubicin 二苯基环辛炔-聚乙二醇-阿霉素

DBCO-PEG-DOX 二苯基环辛炔-聚乙二醇-阿霉素

DBCO-PEG-CPT 二苯基环辛炔-聚乙二醇-喜树碱

DBCO-PEG-Ad 二苯基环辛炔-聚乙二醇-金刚烷

DBCO-PEG-RGD 二苯基环辛炔-聚乙二醇-RGD

DBCO-PEG-cRGD 二苯基环辛炔-聚乙二醇-cRGD

DBCO-PEG-TAT 二苯基环辛炔-聚乙二醇-TAT

FITC-PEG-DBCO 荧光素-聚乙二醇-二苯并环辛炔

DBCO-PEG-Acetylthio 二苯并环辛炔-聚乙二醇-乙酰硫基

DBCO-PEG-Vinylsulfone 二苯并环辛炔-聚乙二醇

DBCO-PEG-Valeric Acids 二苯并环辛炔-聚乙二醇-戊酸

DBCO-PEG-Chloride 二苯并环辛炔-聚乙二醇-氯化物

DBCO-PEG-SAS 二苯并环辛炔-聚乙二醇-琥珀酰亚胺琥珀酰亚胺酯

DBCO-PEG-Tosylate 二苯并环辛炔-聚乙二醇-对甲苯磺酸

DBCO-PEG-Iodoacetate 二苯并环辛炔-聚乙二醇-乙酰基

DBCO-PEG-Lipoic acid 氮杂二苯并环辛炔-聚乙二醇-硫辛酸

DBCO-PEG-SVA 氮杂二苯并环辛炔-聚乙二醇-琥珀酰亚胺戊酸酯

DBCO-PEG-AC 氮杂二苯并环辛炔-聚乙二醇-丙烯酸酯

DSPE-PEG4-DBCO 二硬脂酰基磷脂酰胺-四聚乙二醇-二苯基环辛决

DBCO-S-S-PEG3-Biotin二苯基环辛炔-双硫键-三聚乙二醇-

DBCO-PEG-acid 二苯基环辛炔-聚乙二醇-磷酸

DBCO-PEG-PFP 二苯基环辛炔-聚乙二醇-五氟苯酚

DBCO-PEG-Benzaldehyde 二苯基环辛炔-聚乙二醇

DBCO-PEG-Mesylate 二苯基环辛炔-聚乙二醇-甲磺酸酯

DBCO-PEG-TPP 二苯基环辛炔-聚乙二醇-磷酸三苯酯

DBCO-SS-PEG-Dopamine 二苯基环辛炔-聚乙二醇-多巴胺

DBCO-PEG-Ferrocene 二苯基环辛炔-聚乙二醇-二茂铁

DBCO-SS-PEG-GA 二苯基环辛炔-聚乙二醇-甘草次酸

DBCO-PEG-Cyclodextrin 二苯基环辛炔-聚乙二醇-环糊精

DBCO-PEG-SS-CD 二苯基环辛炔-聚乙二醇-环糊精

DBCO-PEG-GPC 二苯基环辛炔-聚乙二醇-甘磷酸胆碱

DBCO-PEG-SPDP 二苯基环辛炔-聚乙二醇-3-(2-吡啶二硫代)丙酸N-羟基琥珀酰亚胺酯

DBCO-SS-PEG-DOTA 二苯基环辛炔-聚乙二醇-四氮杂环十二烷四乙酸

DBCO-PEG-NOTA 二苯基环辛炔-聚乙二醇-NOTA

DBCO-PEG-DTPA 二苯基环辛炔-聚乙二醇-二乙基三胺五乙酸

DBCO-PEG-TRITC 二苯基环辛炔-聚乙二醇-四甲基罗丹明

DBCO-PEG-6-FAM 二苯基环辛炔-聚乙二醇-6-羧甲基荧光素

DBCO-PEG-FITC 二苯基环辛炔-聚乙二醇-异硫氰基荧光素

DBCO-PEG-CY3 二苯基环辛炔-聚乙二醇-菁染料

DBCO-PEG-CY5 二苯基环辛炔-聚乙二醇-菁染料

DBCO-PEG-CY5.5 二苯基环辛炔-聚乙二醇-菁染料

DBCO-PEG-CY7 二苯基环辛炔-聚乙二醇-菁染料

DBCO-PEG-CY7.5 二苯基环辛炔-聚乙二醇-菁染料

DBCO-PEG-Rhodamine B 二苯基环辛炔-聚乙二醇-罗丹明B

DBCO-PEG-ICG 二苯基环辛炔-聚乙二醇-吲哚菁绿

DBCO-PEG-Comarin 二苯基环辛炔-聚乙二醇-香豆素

DBCO-PEG-Bodipy 二苯基环辛炔-聚乙二醇-氟化硼二吡咯

DBCO-PEG-BDP 二苯基环辛炔-聚乙二醇-氟化硼二吡咯

DBCO-PEG-HMME 二苯基环辛炔-聚乙二醇-血卟啉单甲醚

DBCO-PEG-Ce6 二苯基环辛炔-聚乙二醇-二氢卟吩

DBCO-PEG-DSPE 二苯基环辛炔-聚乙二醇-二硬脂酰基磷脂酰胺

DBCO-PEG-DPPE 二苯基环辛炔-聚乙二醇-二棕榈酰基磷脂酰胺

DBCO-PEG-DOPE 二苯基环辛炔-聚乙二醇-二油酰基磷脂酰胺

DBCO-PEG-DMPE 二苯基环辛炔-聚乙二醇-二肉豆蔻酰基磷脂酰胺

DBCO-PEG-DLPE 二苯基环辛炔-聚乙二醇-二月桂酰基磷脂酰胺

DBCO-PEG-Cholesterol 二苯基环辛炔-聚乙二醇-

DBCO-PEG-DMG 二苯基环辛炔-聚乙二醇-二肉豆蔻酰-sn-甘油

DBCO-PEG-DPG 二苯基环辛炔-聚乙二醇-双棕榈酸甘油酯

DBCO-PEG-DPPS 二苯基环辛炔-聚乙二醇-二棕榈酰磷脂酰

DBCO-PEG-BSA 二苯基环辛炔-聚乙二醇-牛血清白蛋白

DBCO-PEG-HAS 二苯基环辛炔-聚乙二醇-人血清白蛋白

DBCO-PEG-Transferrin 二苯基环辛炔-聚乙二醇-转铁蛋白

DBCO-PEG-TF 二苯基环辛炔-聚乙二醇-转铁蛋白

DBCO-PEG-WGA 二苯基环辛炔-聚乙二醇-小麦胚凝集素

DBCO-PEG-NH2 二苯基环辛炔-聚乙二醇-氨基

DBCO-PEG-Amine 二苯基环辛炔-聚乙二醇-氨基

DBCO-PEG-COOH 二苯基环辛炔-聚乙二醇-羧酸

DBCO-PEG-carboxyl 二苯基环辛炔-聚乙二醇-羧酸

DBCO-PEG-MAL 二苯基环辛炔-聚乙二醇-马来酰亚胺

DBCO-PEG-Maleimide 二苯基环辛炔-聚乙二醇-马来酰亚胺

DBCO-PEG-NHS 二苯基环辛炔-聚乙二醇-N-羟基琥珀酰亚胺

DBCO-PEG-N3 二苯基环辛炔-聚乙二醇-叠氮

DBCO-PEG-azide 二苯基环辛炔-聚乙二醇-叠氮

DBCO-PEG-Alkyne 二苯基环辛炔-聚乙二醇-炔基

DBCO-PEG-SH 二苯基环辛炔-聚乙二醇-炔基

DBCO-PEG-Thiol 二苯基环辛炔-聚乙二醇-炔基

DBCO-PEG-Biotin 二苯基环辛炔-聚乙二醇-

DBCO-PEG-CHO 二苯基环辛炔-聚乙二醇-醛基

DBCO-PEG-aldehyde 二苯基环辛炔-聚乙二醇-乙醛

DBCO-PEG-SS-OPSS 二苯基环辛炔-聚乙二醇-邻吡啶二硫 巯基吡啶

DBCO-PEG-OH 二苯基环辛炔-聚乙二醇-羟基

DBCO-PEG-hydroxyl 二苯基环辛炔-聚乙二醇-羟基

DBCO-PEG-Hydrazide 二苯基环辛炔-聚乙二醇-酰基

DBCO-PEG-HZ 二苯基环辛炔-聚乙二醇-酰基

DBCO-SS-PEG-Silane 二苯基环辛炔-聚乙二醇-硅烷

DBCO-PEG-Acrylates 二苯基环辛炔-聚乙二醇-丙烯酸酯

DBCO-PEG-ACRL 二苯基环辛炔-聚乙二醇-丙烯酸酯

DBCO-PEG-LA 二苯基环辛炔-聚乙二醇-硫辛酸

DBCO-PEG-Tosyl 二苯基环辛炔-聚乙二醇-甲苯磺酸酯

DBCO-PEG-Aminooxy 二苯基环辛炔-聚乙二醇-氨甲基

DBCO-PEG-NPC 二苯基环辛炔-聚乙二醇-硝基苯碳酸盐

DBCO-PEG-Epoxides 二苯基环辛炔-聚乙二醇-环氧化物

DBCO-PEG-EPOX 二苯基环辛炔-聚乙二醇-环氧化物

DBCO-PEG-Acrylamide 二苯基环辛炔-聚乙二醇-丙烯酰胺

DBCO-PEG-Bromide 二苯基环辛炔-聚乙二醇-溴化物

DBCO-PEG-Br 二苯基环辛炔-聚乙二醇-溴化物

DBCO-PEG-Methacrylate 二苯基环辛炔-聚乙二醇-甲基丙烯酸酯

DBCO-PEG-MA 二苯基环辛炔-聚乙二醇-甲基丙烯酸酯

DBCO-PEG-DBCO 二苯基环辛炔-聚乙二醇-二苯基环辛炔

DBCO-PEG-TCO 二苯基环辛炔-聚乙二醇-TCO

DBCO-PEG-TZ 二苯基环辛炔-聚乙二醇-四嗪

DBCO-PEG-Tetrazine 二苯基环辛炔-聚乙二醇-四嗪

DBCO-PEG-Folate 二苯基环辛炔-聚乙二醇-

DBCO-PEG-FA 二苯基环辛炔-聚乙二醇-

DBCO-PEG-CHEMS 二苯基环辛炔-聚乙二醇-半琥珀酸

DBCO-PEG-Phenyl 二苯基环辛炔-聚乙二醇-苯基

 温馨提示：西安齐岳生物科技有限公司供应的产品用于科研，不能用于其他用途，axc,2020.04.09