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生物酶与辅酶的荧光标记(蛋白酶、过氧化物酶、脂肪酶)

时间:2020-9-10阅读:1949
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生物酶与辅酶的荧光标记(蛋白酶、过氧化物酶、脂肪酶)

西安齐岳生物提供以下酶的荧光标记物:
核酸酶、蛋白酶、血清酶、HRP;辣根过氧化物酶、α-淀粉酶、β-葡聚糖酶、菠萝蛋白酶、辅酶A、果胶酶、麦芽糖酶(麦芽提取)、尿素酶,脲酶(巨豆)、纤维素酶、蜗牛酶、乙酰胆碱酯酶(ACE)、脂肪酶、中性蛋白酶、胰凝乳蛋白酶原 A、胰蛋白酶、透明质酸酶、木聚糖酶、溶菌酶(蛋清)、消化酶、淀粉酶、α-淀粉酶、α-糜蛋白酶、α类固醇脱氢酶、β-葡聚糖酶、丁酰胆碱酯酶、脱氢酶(ADH)、凝血酶、单宁酶、尿酸酶、己糖激酶、普鲁兰酶、木瓜蛋白酶、木聚糖酶、氯化溶菌酶晶体、溶葡球菌酶、甘油激酶、磷酸肌酸激酶、纤维素酶、肌酐酶、胃蛋白酶(猪源)、氧化酶、胰酶、脂肪酶、葡聚糖酶、蛋白酶K、谷氨酸脱氢酶、透明质酸酶、链霉蛋白酶E、激酶、磷酸酶、肽酶

CY系列菁染料CY3、CY5、CY5.5、CY7、CY7.5、荧光素FITC、Bodipy系列染料、荧光探针、、ATTO、量子点、罗丹明系列、ICG系列染料

葡萄糖氧化酶的荧光标记(FITC与罗丹明)介绍
提供异硫氢酸荧光素和异硫氢酸四甲基罗丹明分别对葡萄糖氧化酶进行标记,研究了标记蛋白的吸收光谱,荧光光谱,讨论了两种染料标记的位点的差异,同时还研究了脲对标记后染料荧光的影响。

葡萄糖氧化酶是一种取源于黑曲酶的黄案蛋白,分子量大约有158000,该蛋白是二聚体,每个单体由583个氨基酸残基和-一个 FAD(flavin adenine dinucleotide)分子结合而成,有13个a螺.旋,与FAD直接结合的有两个。FAD起到稳定整个蛋白分子三维结构的作用。它的主要性质是专一催化R-D-葡萄糖.我们过去的工作,发现在中性糖脂的单分子膜下,葡萄糖氧化酶具有“插膜”性质。为了进一步研究与脂类的相互作用,有利用荧光染料标记。染料对蛋白的标记是研究蛋白结构,微环境等性质的手段明。利用两种不同结构的染料对葡萄糖氧化酶进行标记,以期研究它们和的不同作用。

 

图1是异硫氢酸四甲基罗丹明,葡萄糖氧化酶,标记后葡萄糖氧化酶的吸收光谱,从图1中可以看出标记后蛋白的吸收光谱并没有发生变化(氨基酸残基的280nm,黄素390nm,450nm吸收峰),在原来的光谱上加了染料的吸收峰,554nm的吸收峰,比较单纯的染料峰值发生了5nm的红移。

 

图2是异硫氢酸荧光素,葡苟糖氧化酶,标记后葡葛糖氧化酶的吸收光谱,同样染料的吸收峰发生了5nm 蓝移。不同染料吸收峰的红移和蓝移说明了染料结合蛋白的位点不- -样. 这一点和 P. Saudan5的工作相似。

图3是异硫氢酸四甲基罗丹明和标记后蛋白在550nm缴发时的荧光发射光谱,比较这两个发射峰并没有的区别,说明舁硫氢酸四甲基罗丹明标记在球形蛋白的外周位于亲水区,所处的微环境和纯水中相似。图4是异硫氢酸荧光素及标记后蛋白在490nm激发时的荧光发射光谱,比较两者的发射峰,标记在蛋白上的染料比纯水中蓝移了7nm,量子产率增加了约30% ,说明该染料处于蛋白的琉水区,疏水微环境使染料的量子产率升高.这两种染料标记后处于不同的微环境很可能是由于异硫氢酸四甲基罗丹明分子的空间位阻比异硫氢酸荧光素要大。


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