大鼠超敏C反应蛋白（hs-CRP）试剂盒使用说明书
本试剂盒仅供研究使用。
检测范围：
0.2µg/L -8µg/L
使用目的：
本试剂盒用于测定大鼠血清、血浆及相关液体样本中超敏 C 反应蛋白（hs-CRP）含量。
实验原理
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中大鼠超敏 C 反应蛋白（hs-CRP）水平。用纯化
的大鼠超敏 C 反应蛋白（hs-CRP）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中
依次加入超敏 C 反应蛋白（hs-CRP），再与 HRP 标记的超敏 C 反应蛋白（hs-CRP）抗体结
合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过*洗涤后加底物 TMB 显色。TMB 在 HRP 酶
的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成终的黄色。颜色的深浅和样品中的超敏 C
反应蛋白（hs-CRP）呈正相关。用酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度（OD 值），通过标准
曲线计算样品中大鼠超敏 C 反应蛋白（hs-CRP）浓度。
试剂盒组成
1 30 倍浓缩洗涤液
2 酶标试剂
3 酶标包被板
4 样品稀释液
5 显色剂 A 液
6 显色剂 B 液
标本要求
20ml×1 瓶
6ml×1 瓶
12 孔×8 条
6ml×1 瓶
6ml×1 瓶
6ml×1/瓶
7 终止液
8 标准品（16µg/L）
9 标准品稀释液
10 说明书
11 封板膜
12 密封袋
6ml×1 瓶
0.5ml×1 瓶
1.5ml×1 瓶
1 份
2 张
1 个
1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能
马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融
2．不能检测含 NaN3 的样品，因 NaN3 抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
操作步骤
1. 标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀
释。
8µg/L
4µg/L
2µg/L
1µg/L
0.5µg/L
5 号标准品
4 号标准品
3 号标准品
2 号标准品
1 号标准品
150µl 的原倍标准品加入 150µl 标准品稀释液
150µl 的 5 号标准品加入 150µl 标准品稀释液
150µl 的 4 号标准品加入 150µl 标准品稀释液
150µl 的 3 号标准品加入 150µl 标准品稀释液
150µl 的 2 号标准品加入 150µl 标准品稀释液
2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、
待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样 50µl，待测样品孔中先加样品稀释液 40µl，
然后再加待测样品 10µl（样品终稀释度为 5 倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽
量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
3. 温育：用封板膜封板后置 37℃温育 30 分钟。
4. 配液：将 30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30 倍稀释后备用
5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置 30 秒后弃去，如此
重复 5 次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶标试剂 50µl，空白孔除外。
7. 温育：操作同 3。
8. 洗涤：操作同 5。
9. 显色：每孔先加入显色剂 A50µl，再加入显色剂 B50µl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色
15 分钟.
10. 终止：每孔加终止液 50µl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
11. 测定：以空白空调零，450nm 波长依序测量各孔的吸光度（OD 值）。 测定应在加终止
液后 15 分钟以内进行。
操作程序总结：
计算
以标准物的浓度为横坐标，OD 值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的
OD 值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与 OD 值计算出标
准曲线的直线回归方程式，将样品的 OD 值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，
即为样品的实际浓度。
