大鼠补体片断3a(C3a)试剂盒使用说明书
本试剂盒用于测定大鼠血清、血浆及相关液体样本中补体片断 3a(C3a)含量。
实验原理
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中大鼠补体片断 3a(C3a)水平。用纯化的大鼠补体
片断 3a(C3a)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入补体片断
3a(C3a)，再与 HRP 标记的补体片断 3a(C3a)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经
过*洗涤后加底物 TMB 显色。TMB 在 HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转
化成终的黄色。颜色的深浅和样品中的补体片断 3a(C3a)呈正相关。用酶标仪在 450nm 波
长下测定吸光度（OD 值），通过标准曲线计算样品中大鼠补体片断 3a(C3a)浓度。
孔、
待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样 50μl，待测样品孔中先加样品稀释液 40μl，
注意事项
1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡 15-30 分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未
用完，板条应装入密封袋中保存。
2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。
3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间
控制在 5 分钟内，如标本数量多，*使用排枪加样。
4． 请每次测定的同时做标准曲线，做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本 OD 值
大于标准品孔孔的 OD 值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n 倍）后再测定，计
算时请后乘以总稀释倍数（×n×5）。
5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6．底物请避光保存。
7．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.
8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
9．本试剂不同批号组分不得混用。
10. 如与英文说明书有异，以英文说明书为准。
保存条件及有效期
1．试剂盒保存：；2-8℃。
2．有效期：6 个月
然后再加待测样品 10μl（样品终稀释度为 5 倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽
量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
3. 温育：用封板膜封板后置 37℃温育 30 分钟。
4. 配液：将 20 倍浓缩洗涤液用蒸馏水 20 倍稀释后备用
5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置 30 秒后弃去，如此
重复 5 次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶标试剂 50μl，空白孔除外。
7. 温育：操作同 3。
8. 洗涤：操作同 5。
9. 显色：每孔先加入显色剂 A50μl，再加入显色剂 B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色
15 分钟.
10. 终止：每孔加终止液 50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
11. 测定：以空白空调零，450nm 波长依序测量各孔的吸光度（OD 值）。 测定应在加终止
液后 15 分钟以内进行。
即为样品的实际浓度。
