古朵经验总结：确定ELISA标准曲线的吸光值的方法
 

　　每个ELISA试验都要做标准曲线，所以经常有客户咨询对于标准曲线的吸光值具体有什么要求，多大范围比较合?有些人是标曲中吸光值范围在0-1.1072，经验丰富的科研者都建议不要超过1，浓度太大了要稀释。那么该如何稀释，稀释了不就不是标曲上的那个浓度值了吗?

　　一、依据郎伯比尔定律，在0.2~0.8吸光度值与浓度具有线性关系，尽量在这个范围内。

　　二、在标准曲线的制作中，选择不同浓度的标准样品进行试验，测定其吸光值。直到他们的相关度不是很好之前都是可以的。相关度是0.999以上。所以一般情况下，吸光值在1左右能能够达到相关度较好的水平!

　　三、得看你的待测的样品的不同浓度的吸光光度值，大致的落在什么范围(用的标准曲线的方法是不适合待测样品，有没有沉底或者其他的不正常的现象)，样品的浓度需要提前摸索摸索，范围拉大(如：6.25、12.5、25、50、100、200、400、600、800、1000、2000等)确定好实验所需要的浓度范围，就是坐标曲线了。的建议就是：做3组平行样(也包括样品)，这样线性关系会更好。

　　四、稀释相对而言比较容易。如配1000μg/ml的样品，可以通过其稀释成800、600、400.具体的如取1000的浓度4ml加入溶剂(水等)1ml可以得到800μg/ml依次类推。

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