大鼠高敏甲状腺素(u-T4)ELISA试剂盒实验注意事项

　　1)ELISA实验时，应分别以阳性对照与阴性对照控制实验条件，待检样品应一式二份，以保证实验结果的准确性。有时本底较高说明有非特异性反应，可采用羊血清、免血清等封闭。

　　2) 在ELISA实验中，进行各项实验条件的选择是很重要的，其中包括:

　　(1)ELISA实验固相载体的选择:许多物质可作为国相载体，如聚氯乙、聚苯乙烯、聚内胺和纤维素等，形式可以是凹孔平板、试管、珠粒等。

　　目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管选择何种载体，在使用前均可进行信选:用等量抗原包被，在同一实验条性下进行反应观察其显色反应的均一性，据此判明其吸附性能。

　　(2) ELISA实验包被抗体(或抗原)的选择:将抗体(或抗原)吸附在固相载本表面时，要求度要好，吸附时一股要求pH在9.09.6之间。吸附温度，时间及其蛋白量也有一定影响，一般多采用418-24h。蛋白质包被的Zu适浓度需进行滴定:即用不同的蛋白质浓度(0.1、1.0和10ugml等)进行包被后，在其它实验条件相同时，观察阳性标本的OD值，选择OD值zu大而蛋白量2u少浓度，对于多数蛋白质来说通常为1-10ug/ml.

　　(3)ELISA实验中酶标记抗体工作浓度的选择:首先用直接ELISA实验法进行初步效价的滴定，然后再固定其它条件或采取方阵法"(包被物、待检样品的参考品及酶标记抗体分别为不同的稀释度)在正式ELISA实验系统里准确地滴定其工作浓度。(4)ELISA实验中酶的底物及供氢体的选择:对供氢体的选择要求是价廉、安全、有明显的显色反应，而本身无色。有些供氢体(如OPD等)有潜在的致癌作用，应注意防护。有条件者应使用不致癌、灵敏度高的供氢体，如TMB和ABTS是目前较为满意的供体，底物作用一段时间后，应加入强酸或强碱以终止反应，通常底物作用时间，以10-30 m为直，底物使用液必须新鲜面制，尤其是在临用前加入。

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