古朵详解：elisa的类型及实验原理

　　ELISA法类型：

　　夹心法常用于检测大分子抗原，将具有专一性的抗体固著于塑胶孔盘上，完成后洗去多余抗体，重复两次，洗去多余未键结二次抗体，加入酶底物使酵素呈色，以肉眼或仪器读取呈色结果。

　　间接法常用于检测抗体，将已知的抗原固著于塑胶孔盘上，完成后洗去多余的抗原，重复两次。洗去多余未键结二次抗体，加入酶底物使酶呈色，藉仪器测定塑胶盘中的吸光值，以评估有色终产物的含量即可测量待测抗体的含量。

　　竞争法是一种较少用到的ELISA检测机制，一般用于检测小分子抗原，将具有专一性的抗体固著于塑胶孔盘上，完成后洗去多余抗体;加入待测检体、带有酶的抗原，与塑胶孔盘上的抗体专一性键结。塑胶孔盘上固著抗体数量有限，检体中抗原量越多，带有酶的抗原可键结固著抗体就越少。

　　夹心法

　　夹心法常用于检测大分子抗原，一般之操作步骤为:

　　将具有专一性之抗体固著(coating)于塑胶孔盘上，完成后洗去多余抗体

　　加入待测检体，检体中若含有待测之抗原，则其会与塑胶孔盘上的抗体进行专一性键结

　　洗去多余待测检体，加入另一种对抗原专一之一次抗体，与待测抗原进行键结

　　洗去多余未键结一次抗体，加入带有酵素之二次抗体，与一次抗体键结

　　洗去多余未键结二次抗体，加入酵素受质使酵素呈色，以肉眼或仪器读取呈色结果

　　间接法

　　间接法常用于检测抗体，一般之操作步骤为：

　　将已知之抗原固著于塑胶孔盘上，完成后洗去多余之抗原。

　　加入待测检体，检体中若含有待测之一次抗体，则其会与塑胶孔盘上的抗原进行专一性键结。

　　洗去多余待测检体，加入带有酵素之二次抗体，与待测之一次抗体键结。

　　洗去多余未键结二次抗体，加入酵素受质使酵素呈色，藉仪器(ELISA reader)测定塑胶盘中的吸光值(OD值)，以评估有色终产物的含量即可测量待测抗体的含量。

　　竞争法

　　竞争法是一种较少用到的ELISA检测机制，一般用于检测小分子抗原，其操作步骤为：

　　将具有专一性之抗体固著于塑胶孔盘上，完成后洗去多余抗体

　　加入待测检体，使检体中的待测抗原与塑胶孔盘上的抗体进行专一性键结

　　加入带有酵素之抗原，此抗原也可与塑胶孔盘上的抗体进行专一性键结，由于塑胶孔盘上固著的抗体数量有限，因此当检体中抗原的量越多，则带有酵素之抗原可键结的固著抗体就越少，亦即，两种抗原皆竞相与塑胶孔盘上抗体键结，即所谓竞争法之由来。

　　洗去检体与带有酵素之抗原，加入酵素受质使酵素呈色，当检体中抗原量越多，代表塑胶孔盘内留下之带有酵素的抗原越少，显色也就越浅。

　　当需要侦测无法获得两种以上单一性抗体的抗原，或是不易得到足够的纯化抗体以固著于孔盘上时，一般会考虑使用竞争法ELISA。

　　elisa实验原理：

　　在测定时把受检标本和酶标抗原或抗体，按不同步骤与固相载体表面抗原或抗体起反应。用洗涤方法使固相载体上的抗原抗体复合物与其他物质分开，最后结合在固相载体上的酶量与标本中受检物质的量成一定的比例。

　　加入酶反应的底物后，底物被酶催化变为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，故可根据颜色反应的深浅有无定性或定量分析。

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