ELISA实验之洗涤小技巧及提纯的方法

　　在ELISA实验中，主要是靠洗涤来达到分离游离的和结合的酶标记物的目的。洗涤在ELISA过程中虽不是一个反应步骤，却也决定着实验的成败。通过洗涤来清除残留在板孔中没能与固相抗原或抗体结合的物质，以及在反应过程中非特异性地吸附于固相载体的干扰物质。今天古朵生物技术小编来介绍一下ELISA实验的洗涤小技巧吧!

　　洗涤的方式除某些ELISA仪器配有特殊的自动洗涤仪外，手工操作有浸泡式和流水冲洗式两种，过程如下：

　　(1)浸泡式

　　a.吸干或甩干孔内反应液;

　　b.用洗涤液过洗一遍(将洗涤液注满板孔后，即甩去);

　　c.浸泡，即将洗涤液注满板孔，放置1-2分钟，间歇摇动，浸泡时间不可随意缩短;

　　d.吸干孔内液体。吸干应，可用水泵或真空泵抽吸，也可甩去液体后在清洁毛巾或吸水纸上拍干;

　　e.重复操作c 和d，洗涤3-4次(或按说明规定)。在间接法中如本底较高，可增加洗涤次数或延长浸泡时间。微量滴定板多采用浸泡式洗涤法。洗涤液多为含非离子型洗涤剂的中性缓冲液。聚苯乙烯载体与蛋白质的结合是疏水性的，非离子型洗涤剂既含疏水基团，也含亲水基团，其疏水基团与蛋白质的疏水基团借疏水键结合，从而削弱蛋白质与固相载体的结合，并借助于亲水基团和水分子的结合作用，使蛋白质回复到水溶液状态，从而脱离固相载体。

　　(2)流水冲洗式

　　流水冲洗法最初用于小珠载体的洗涤，洗涤液仅为蒸馏水甚至可用自来水。洗涤时附接一特殊装置，使小珠在流水冲击下不断地滚动淋洗，持续冲洗2分钟后，吸干液体，再用蒸馏水浸泡2分钟，吸干即可。浸泡式犹如盆浴，流水冲洗式则好比淋浴，其洗涤效果更为，且也简便、快速。

　　已有实验表明，流水冲洗式同样也适用于微量滴定板的洗涤。洗涤时设法加大水流量或加大水压，让水流冲击板孔表面，洗涤效果更佳。

　　Elisa试剂盒提纯的方法：

　　在ELISA实验中，ELISA试剂盒的好坏会直接影响实验的最终结果，今天就向大家介绍一下ELISA试剂盒提纯的方法。

　　1、蒸馏：对于易挥发的试剂，如常用的无机酸，有机溶剂等是比较常用的提纯方法，可以根据沸点的高低选用常压或减压蒸馏法。

　　2、升华：对于某些易升华的试剂，如碘、萘等，此法比较简便。

　　3、重结晶：适用于大多数固体试剂的提纯，其关键是选择好合适的溶剂。

　　4、溶剂萃取：无论是将母体还是将杂质萃取到有机溶剂相中，均可达到提纯的目的。

　　5、离子交换色谱分离。

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