ELISA试剂盒中血浆和血清可同等应用

　　古朵生物—将ELISA试剂盒的常见操作要点，归纳总结如下:

　　1 标本的采取和保存

　　可用作ELISA试剂盒测定的标本十分广泛，体液、分泌物和排泄物)等均可作标本以测定其中某种抗体或抗原成份。有些标本可直接进行测定(如血清、尿液)，有些则需经预处理(如粪便和某些分泌物)。大部分ELISA检测均以血清为标本。血浆中除尚含有纤维蛋白原和抗凝剂外，其他成份均同等于血清。制备血浆标本需借助于抗凝剂，而血清标本只要待血清自然凝固、收缩后即可取得。除特殊情况外，在医学检验中均以血清作为检测标本。在血清标本可按常规方法采集，应注意避免溶血，红细胞溶解时会释放出具有过氧化物酶活性的物质，以HRP为标记的测ELISA试剂盒定中，溶血标本可能会增加非特异性显色。

　　血清标本宜在新鲜时检测。如有细菌污染，菌体中可能含有内源性HRP，也会产生假阳性反应。如在冰箱中保存过久，其中的可发生聚合，在间接法ELISA试剂盒中可使本底加深。一般说来，在5天内测定的血清标本可放置于4℃，超过一周测定的需低温冰存。冻结血清融解后，蛋白质局部浓缩，分布不均，应充分混匀宜轻缓，避免气泡，可上下颠倒混和，不要在混匀器上强烈振荡。混浊或有沉淀的血清标本应先离心或过滤，澄清后再检测。反复冻融会使抗体效价跌落，所以测抗体的血清标本如需保存作多次检测，宜少量分装冰存。保存血清自采集时就应注意无菌操作，也可加入适当防腐剂(见3.2.4)。

　　2 ELISA试剂盒的准备

　　按ELISA试剂盒说明书的要求准备实验中需用的试剂。ELISA试剂盒中用的蒸馏水或去离子水，包括用于洗涤的，应为新鲜的和高质量的。自配的缓冲液应用pH计测量较正。从冰箱中取出的试验用试剂应待温度与室温平衡后使用。ELISA试剂盒中本次试验不需用的部分应及时放回冰箱保存。

　　Elisa试剂盒具体操作如下：

　　1、试剂准备：根据选择的试剂盒准备好相关试剂。

　　2、样品准备：血清、血浆、尿液、胸腹水、脑脊液、细胞培养上清、组织标本等。

　　3、试剂配置

　　4、抗体包被：Coating Buffer: 稀释成Coating Buffer (1×)，根据产品说明书稀释抗体，每孔加入100ul预稀释的抗体，4°C过夜孵育(16-18h)。

　　5、使用前，将所有试剂充分混匀，避免产生泡沫。

　　6、根据实验孔(空白和标准品)数量，确定所需的板条数目。样品(含标准品)和空白都应做复孔。

　　7、加样：100 μL/well 加入稀释后的 Cytokine standard 至标准品孔，100 μL/well 加入样品至样品孔，100 μL/well 加 Dilution buffer R (1×)入空白对照孔。

　　8、加检测抗体：根据产品说明书加入 Biotinylated antibody 。混匀后盖上封板膜，室温孵育。

　　9、洗板：扣去孔内液体，300 μL/well 加入 1×washing buffer;停留 1 分钟后弃去孔内液体。重复 3 次，每一次在滤纸上扣干。

　　10、加酶：根据产品说明书加入稀释好的酶，孵育。

　　11、洗板：重复步骤 5 。

　　12、显色：100 μL/well 加入 TMB，室温(18-25℃)避光孵育5-30分钟之间，根据孔内颜色的深浅(深蓝色)来判定终止反应。通常显色 10-20 分钟可以达到很好的效果。

　　13、终止反应：迅速 100 μL/well 加入 Stop solution 终止反应。

　　14、读板：终止后 10 分钟内，用检测波长(measurement wavelength)450 nm 读值。推荐用双波长即检测波长(measurement wavelength)450 nm 、参考波长或校正波长(reference wavelength )610-630 nm 同时读板，测量结果会更准确。

　　Elisa试剂盒 上海古朵生物科技有限公司成立于上海浦东新区。是一家专门从事生物技术相关产品，励志研发和销售的综合性生物公司，产品远销多个国家和地区，我们将一如既往地秉承“一切为了满足客户的需求"的经营宗旨;牢固树立“以客户需求为准则、以市场需求为导向，不断开发高质量的新产品，提供客户满意的综合服务质量"的方针。古朵试剂盒