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ELISA试剂盒试验抗体的制备办法您知道吗?

时间:2023-2-1阅读:247
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  ELISA试剂盒试验抗体的制备办法您知道吗?

  ELISA试剂盒途径的挑选决定于抗原的生物学特性和理化特性,如激素、酶、毒素等生物学活性抗原,通常不宜选用静脉打针。

  不一样个别对共同抗原的反响性不一样,并且不一样抗原发生免疫反响的才能也有强有弱,因而常常在打针抗原的一起,参加能增强抗原的抗原性物质,以影响机体发生较强的免疫反响,这种物质称为免疫佐剂。免疫前取等容积*或不*佐剂与免疫原溶液混合,用振荡器混匀成乳状,也可以在免疫前取需求量佐剂置乳钵中研磨,均匀后再边磨边滴参加等容积抗原液(其中加卡介苗3~4mg/ml或不加),加完后再承继研磨成乳剂,滴于冰水上5~10min内*不涣散中止。

  穿插反响率低,标明抗血清的特异性好,反之则特异性差。搜集的血液置于室温下1h分配,凝集后,置4℃下,过夜(切勿冰冻)分出血清,离心,4000rpm,10min。取兔血有两种办法,一是耳缘静脉或耳动脉放血,二是颈动脉入血,也可心脏采血。加强免疫时用不*佐剂,初度免疫时皮下打针百日咳疫苗0.5ml,加强免疫时不用打针百日咳疫苗。

  在无菌条件,吸出血清,分装(0.05~0.2ml),贮于-40℃以下冰箱,或冻干后储存。取动脉或静脉放血时,将兔放入一个特造的木匣或笼内,耳露于箱(笼)外,也可由另一人抓住兔身。防止扔掉抗原,亦可用一打针器装抗原液,另一打针器装佐剂,二者以聚乙烯塑料管联接,然后二者往复重复抽吸,约数十分钟后即能*乳化。

  每2~3周加强免疫一次。

  制作办法:按比例将羊毛脂与石蜡油置容器内,用超声波使之混匀,高压灭菌,置4℃下保存备用。

  ELISA试剂盒特异性是以穿插反响率来标明的。

  ELISA试剂盒穿插反响率通常是用竞赛按捺曲线来断定的。

  若用兔,用纯种新西兰兔,一组三只,兔的体重以2~3kg为宜。

  家兔是zui常用以发生抗体的动物,因而这儿首要议论兔血的搜集。

  颈动脉放血时,将兔仰卧,固定于兔台,剪去颈部的毛,切开肌肤,暴露颈动脉,插管,放血。

  不一样浓度的抗原和近似抗原物质别离做竞赛按捺曲线,核算各自的联络率(B/T或B/B0),求出各清闲IC50时的浓度,按下列公式核算穿插反响率。二礼拜后,可在另一耳放血。

  此法可重复屡次放血。

  作免疫用的动物有哺乳类和禽类,首要为羊、马、家兔、猴、猪、豚鼠、鸡等,试验室常用者为家兔、山羊和豚鼠等。

  在第2次加强免疫后2周,从耳缘静脉取2~3ml血,制备血清,查看抗体效价。羊等较大动物以颈静脉、动脉取血,鼠等小动物取血可参看有关资料。

  剪去耳缘的毛,用少量二甲苯涂抹耳廓,30s后,耳血管扩大、充血。用手轻拉耳尖,以单面剃须刀或尖的手术刀片,灵敏切开动脉或静脉,血液即流出,每次可搜集30~40ml。

  抗原剂量,初度剂量为300~500μg,加强免疫的剂量约为初度剂量为1/4分配。

  C冰箱保存。查看合格后即以其中一打针器作打针用。

  佐剂除了延伸抗原在体内的存留时间,添加抗原影响作用外,首要的是,它能影响网状内皮体系,使介入免疫反响的免疫活性细胞增多,推动T细胞与B细胞的彼此作用,然后增强机体对抗原的细胞免疫和抗体的发生。

  ELISA试剂盒未到达预期效价,需再进行加强免疫,直到满意时中止。

  ELISA试剂盒 上海古朵生物科技有限公司成立于上海浦东新区。是一家专门从事生物技术相关产品,励志研发和销售的综合性生物公司,产品远销多个国家和地区,我们将一如既往地秉承“一切为了满足客户的需求"的经营宗旨;牢固树立“以客户需求为准则、以市场需求为导向,不断开发高质量的新产品,提供客户满意的综合服务质量"的方针。

 

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