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RNase Inhibitor(RNase 抑制剂)说明书

时间:2020/6/23阅读:362
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货号:C6101

规格:5000U

产品组成及保存条件:

编号

规格

储存条件

C6101

5000U

-20°C,保质期24个月

 

浓度40000U/ ml

产品简介:

RNase Inhibitor可与RNase 非共价结合,开成1:1的复合物,可以特异性抑制RNase ARNase BRNase C和人胎盘RNase,不抑制T1RNase H活性,具有广谱的RNase抑制活性。对RNase1RNaseT1S1核酸酶,RNase H或来源于曲霉属的RNase无抑制作用。兼容性好;不影响M-MLVAMV Reverse TransciptaseTaq DNA PolymeraseT3T7SP6 RNA Polymerase 活性,在较宽的pH范围内(pH 5-8)均可发挥作用。尿素及巯基类试剂可以解离本品与RNase 形成的复合物,使RNase复活而RNase Inhibitor 不可逆失活,因此反应体系中应避免尿素及巯基类试剂存在。

RNase抑制剂的分子量为50kDa,通过非共价键以1:1的比例与RNase结合而抑制其酶活,结果常数大于1014

产品应用:

1、RT-PCR

2、cDNA 合成反应,提高多聚核糖体的产量和活性;

3、体外无细胞系统转录或翻译(Cell-free in vitro transcription or translation system)

4、酶催化的RNA标记反应;

5、RNA的完整性要求高的其他应用。

产品来源:

来自猪的RNase抑制基因在大肠杆菌中表达和多步纯化精制而成。

活性定义:

一个活性单位(U)定义为:抑制5ng RNase A 50%活性所需的RNase Inhibitor量。

活性测定是通过抑制RNaseA对胞嘧啶 2´,3´ -环单磷酸盐的水解来测定的。

酶储存液:

20mM HEPES-KOH50mM KCI,8mM DTT,50%Glycerol, PH7.6@25

保存条件:

-20°C,有效期24个月。

使用说明:

使用RNase Inhibitor避免RNase污染方法:加入抑制剂,使反应终浓度达到1U/ul。再加入组分过程中,RNase抑制剂应在其他可能是RNase污染源的组分(如酶、微量质粒)之前加入。

注意事项:

1、RNase Inhibitor 是一种50kDa的蛋白质,在变性条件下会失活。

2、RNase Inhibitor 应在低于50℃的温度下使用。

3、本品抑制RNase活性的pH值范围较广,在pH7~8时表现大活性。

4、避免起泡剧烈搅拌、涡旋等操作,以防止本品失活。

 

附:RNA酶抑制剂各个实验反应量推荐:

1.RT PCR:推荐反应体系按照1Uul

2.cDNA合成:推荐反应体系按照0.5~1Uul

3.体外无细胞系统转录:推荐反应体系按照15~20Uul

4.SP6T7RNA聚合酶的体外转录:推荐反应体系按照1Uul

5.多核糖体分离:推荐反应体系按照1Uul

6.体外翻译:推荐反应体系按照1Uul

7.酶催化的RNA标记反应:推荐反应体系按照1Uul

 上述所述实验给出的是推荐反应用量,具体的RNA酶抑制剂在各个实验反应中的jia用量需要具体实验具体分析,因为RNA酶抑制剂的具体定量与不同实验反应中的RNase含量和反应Buffer都有关联,所以,实验反应中的jiaNRA酶抑制剂的用量建议还是要做一下预实验来确定。

 

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