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Biolog方法用于环境微生物群落研究
阅读：243 发布时间：2023-7-13Biolog方法美国的BIOLOG公司于1989年开发成功，最初就根据其中具体类型的代谢指纹来鉴定已分离纯化的环境微生物物种，至今已经能够鉴定包括细菌、酵母菌和霉菌在内的2000多种病原微生物和环境微生物。1991年，Garland和Mills开始将这种方法应用于土壤微生物群落的研究，该项工作引起了许多微生物生态学研究者的广泛关注。测定原理：Biolog研究环境微生物的载体是微孔板(micro plate)，每板包含96个孔，其中95个孔中加入了95种单一碳源和四唑染料，另外一个未加碳源的孔中加水为对照，环境微生物接种到微孔板上的孔中后，孔中的环境微生物就可能利用其中的碳源而发生氧化还原作用，而孔中一旦有电子转移，这种四唑染料就会变为紫色，同时也表明这种碳源被接种到其中的环境微生物所利用。颜色的深浅可以反映环境微生物对碳源的利用程度。由于环境微生物对不同碳源的利用能力很大程度上取决于环境微生物的种类和固有性质，因此在一块微平板上同时测定环境微生物对不同单一碳源的利用能力(sole carbon source utilization，SCSU)，就可以鉴定纯种环境微生物或比较分析不同的环境微生物群落。
Biolog方法用于环境微生物群落研究，具有以下特点：①灵敏度高，分辨力强，对SCSU的测定可以得到被测环境微生物群落的代谢特征指纹(metabolic finger print)，分辨环境微生物群落的微小变化；②无需分离培养纯种环境微生物，可最大限度地保留环境微生物群落原有的代谢特征；③测定简便，数据的读取与记录可以由计算机辅助完成，环境微生物对不同碳源代谢能力的测定在一块微平板上一次完成，效率大大提高。
Biolog 系统主要包括Biolog微平板、微平板读数器和一套微机系统，具体说明如下：
Biolog系统组成与说明：
Biolog微平板——共96孔，孔中含有营养液和四唑盐染料TTC；其中1孔不含碳源，为对照孔，其他95孔含有不同单一碳源；
读数器——测定一定波长下每个小孔内的吸光度及变化；
微机系统——与读数器相连，自动完成数据采集、传输、贮存与分析。
Biolog方法操作的主要流程：
步骤1，平板选择：针对G+和G-细菌选择不同平板（Biolog GP、Biolog GN），各孔内碳源也可调控；
步骤2，样品制备：将微生物从环境介质中提取出来，控制到适宜浓度（浊度表示）；
步骤3，加样：取一定体积菌液（一般150μL/孔），平行加入各孔；
步骤4，培育与读数：恒温培育，用微平板读数器记录各孔吸光度值变化。