IFN-Yelisa检测试剂盒乳酸菌在白酒发酵过程中的功能与作用研究
1、 样品的采集样品为山东芝麻香型白酒酒醅。芝麻香型白酒酿造分为堆积发酵和窖池发酵两个发酵阶段，跟踪采集了芝麻香型白酒酿造过程中堆积发酵和窖池发酵过程中的酒醅。选择 I、II 两个班组堆积酒醅作为平行样品进行跟踪取样，不同取样位置取 50 g 左右酒醅混合成一个样品。堆积发酵周期为 18 h，每隔 6 h 取一次样品，取样时间分别为 0、6、12、 18 h。窖池发酵周期为 50 d，取样时间分别为 3、5、 10、15、20、25、30、35、40、50 d。将采集的酒醅样品密封，−80 °C 保存。2、 主要试剂和仪器*、*、10 mmol/L Tris-HCl (pH 8.0)、氯化钠、10% SDS、乙酸钠、、乙醇购自国药集团化学试剂(北京)有限公司；饱和酚溶液、2SG Fast qPCR Master Mix (High Rox)购自生工生物工程(上海)股份有限公司。冷冻离心机，Beckman Coulter 公司；MiniBeadbeater 细胞破碎仪，Biospec 公司；Genius 3 旋涡振荡器，IKA 公司；真空干燥箱，上海一恒科技有限公司；NanoDrop 8000 蛋白核酸测定分光光度计、荧光定量 qPCR，Thermo Fisher Scientific 公司。
3、 DNA 的提取、PCR 扩增及测序准确称取 7 g 酒醅，加入 20 mL 无菌的 PBS 缓冲液(0.042 3 mol/L *，0.057 7 mol/L *)悬浮，漩涡振荡，300×g 离心 5 min，收集上清液。将上清液 10 000×g 离心 15 min 收集细胞沉淀。DNA 的提取参考 Wang 等的方法。采用适用于大多数细菌的 16S rRNA 基因 V3−V4 区通用引物 338F (5′-ACTCCTACGGGAGGCAGCA-3′) 和 806R (5′-GGACTACHVGGGTWTCTAAT-3′)。 PCR 扩增体系(20 μL)：5×FastPfu 缓冲液 4 μL， 2.5 mmol/L dNTPs 2 μL，5 μmol/L 上、下游引物各 0.8 μL，FastPfu 聚合酶 0.4 μL，样品基因组模板 DNA 10 ng，超纯水补足至 20 μL。PCR 反应条件： 95 °C 3 min；95 °C 30 s，55 °C 30 s，72 °C 45 s，共 27 个循环；72 °C 10 min。将 PCR 产物进行琼脂糖凝胶电泳分析，对 DNA 条带进行切胶纯化回收。纯化后的 PCR 产物进行定量，根据定量结果混合不同样品的 PCR 产物。构建 MiSeq 文库，使用 Illumina MiSeq PE300 测序平台测序。通过 QIIME (v1.8.0)和 Mothur 对测序结果分析处理，去掉质量不好的序列、长度小于 150 bp 的序列及含嵌合体的序列，并将相似度大于 97%的序列聚类为一个操作分类单元 OTU (Operational taxonomic unit)。计算 Shannon 指数(反映样品的多样性程度) 和 Chao1 指数(反映样品中群落丰富度)，评估样品微生物多样性。利用在线比对引擎 BLAST 将 OTU 的代表序列在美国国家生物技术信息中心(National Center for Biotechnology Information，NCBI)上与 GenBank 数据库中的序列进行比对，获得 OTU 的物种信息。
4、 实时荧光定量 PCR 选择乳酸菌特异性定量分析引物 Lac1 (5′-AGC AGTAGGGAATCTTCCA-3′)和 Lac2 (5′-ATTYCAC CGCTACACATG-3′)对发酵过程中乳酸菌总量进行定量。20 μL 反应体系：2×SG Fast qPCR Master Mix (High Rox) 10 μL，上、下游引物(20 μmol/L)各0.4 μL，模板 1 μL，超纯水 8.2 μL。反应条件：95 °C 3 min；95 °C 3 s，60 °C 30 s，共 40 个循环；95 °C 5 s，60 °C 30 s。以 Lactobacillus fermentum 为标准菌株，培养后显微镜计数，并提取基因组作为模板进行实时荧光定量 PCR 特异性扩增，以含有 Lactobacillus fermentum 个数的对数为横坐标，Ct 值为纵坐标绘制标准曲线。以白酒酒醅样品宏基因组为模板进行实时荧光定量 PCR 特异性扩增，获得相应的Ct值，并根据标准曲线计算出酒醅中乳酸菌含量。
IFN-Yelisa检测试剂盒大鼠*S转移酶α1(GSTα1)ELISA试剂盒 ，英文名： GSTα1 ELISA Kit
大鼠谷光甘肽合成酶(GSS)ELISA试剂盒 ，英文名： GSS ELISA Kit
大鼠谷丙转氨酶(ALT)ELISA试剂盒 ，英文名： ALT ELISA Kit
大鼠*合成酶(GS)ELISA试剂盒 ，英文名： GS ELISA Kit
大鼠*脱羧酶2(GAD2)ELISA试剂盒 ，英文名： GAD2 ELISA Kit
大鼠*脱氢酶(GDH)ELISA试剂盒 ，英文名： GDH ELISA Kit
大鼠*半*连接酶催化亚基(GCLC)ELISA试剂盒 ，英文名： GCLC ELISA Kit
大鼠*半*连接酶(GCLM)ELISA试剂盒 ，英文名： GCLM ELISA Kit
大鼠孤啡肽(OFQ)ELISA试剂盒 ，英文名： OFQ ELISA Kit
大鼠睾酮(Testosterone)ELISA试剂盒 ，英文名： Testosterone ELISA Kit
大鼠高香草酸(HVA)ELISA试剂盒 ，英文名： HVA ELISA Kit
大鼠高铁血红蛋白还原酶(MHBR)ELISA试剂盒 ，英文名： MHBR ELISA Kit
大鼠高迁移率族蛋白1(HMG1)ELISA试剂盒 ，英文名： HMG1 ELISA Kit
大鼠干细胞因子(SCF)ELISA试剂盒 ，英文名： SCF ELISA Kit
大鼠干扰素诱导T-细胞α亚族趋化剂(ITαC)ELISA试剂盒 ，英文名： ITαC ELISA Kit
大鼠干扰素γ诱导单核因子(MIγ)ELISA试剂盒 ，英文名： MIγ ELISA Kit
大鼠干扰素γ(IFNγ)ELISA试剂盒 ，英文名： IFNγ ELISA Kit
大鼠干扰素β(IFNβ)ELISA试剂盒 ，英文名： IFNβ ELISA KitIFN-Yelisa检测试剂盒
