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上海抚生实业有限公司
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阅读:255发布时间:2019-1-9
小鼠20S-蛋白酶体elisa检测试剂盒实验原理:
本试剂盒采用竞争法检测样本中小鼠20S-蛋白酶体(20S-PSM)的含量。向预先包被了抗体的酶标孔中加入样本,再加入*标记的识别抗原,在37℃下孵育30min,两者与固相抗体竞争结合形成免疫复合物,经PBST洗涤除去未结合的*抗原,然后加入亲和素-HRP,在37℃下孵育30min,亲和素-HRP与*抗原结合,洗涤后结合的HRP催化TMB(四甲基联苯胺)成蓝色,随后在酸的作用下转化成黄色,在450nm波长下有吸收峰,吸光值与样本中抗原的浓度成负相关。
小鼠20S-蛋白酶体elisa检测试剂盒操作步骤:
1、加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50µl,待测样品孔中先加样品稀释液40µl,然后再加待测样品10µl(样品zui终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。
2、温育:用封板膜封板后置 37℃温育30分钟。
3、配液:将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用
4、洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。
5、加酶:每孔加入酶标试剂50µl,空白孔除外。
6、显色:每孔先加入显色剂A50µl,再加入显色剂B50µl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色
10 分钟.
7、终止:每孔加终止液50µl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
8、测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。测定应在加终止液后15分钟以内进行。100U2~8℃
elisa检测试剂盒
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