艾美捷大鼠实时定量PCR DNA损伤分析试剂盒说明书

简介：这种DNA损伤分析试剂盒用于测定损伤的8.2kb大鼠体内和体外的线粒体DNA，在QPCR分析后用实时PCR定量复制的DNA。该试剂盒可对多达20个样本进行重复分析（40个反应）。

艾美捷大鼠实时定量PCR DNA损伤分析试剂盒#DD2R组分：

▪ 2X浓缩QPCR缓冲液（450µL）

▪ QPCR引物混合物【正向引物和反向引物各2μM】（225μL）

▪ QPCR检测DNA[50纳克/μL]（10μL）

▪ 5X增强剂（180μL）

▪ 8.2 kb实时标准[1ng/uL]（25μL）

▪ 实时引物混合物【正向引物和反向引物各5μM】（100μL）

不包括在套件中：

▪ SYBR Green Mix（可单独购买）

▪ 不含核酸酶的水

▪ PCR管和盖

DNA损伤分析试剂盒相关程序分析：

1.QPCR热循环仪程序

▪ 此配置文件的预编程PCR机器：

a.98°C，30秒

b.98°C，10秒

c.63°c，10秒

d.72°C，4分钟

e.30个循环（步骤b至d）。

f.72°C，10分钟

g.4°C

程序：以下程序适用于每20μL的反应。增加所有金额

根据管道总数成比例。

▪ 每个PCR管（20μL Rx），混合以下物质：

a.10.0μL 2X QPCR浓缩缓冲液

b.4.0μL 5倍增强剂

c.5.0μL QPCR引物混合物（每个引物2μM，正向/反向）

d.1.0μL DNA（50纳克/μL）

*等分反应前的涡流储备缓冲液

2.实时PCR程序（用于20μL实时PCR反应）

▪ 建议将来自QPCR的PCR DNA产物稀释10倍

在进行实时PCR步骤之前用不含核酸酶的水。

▪ 混合以下物质：

o 10μL SYBR绿色混合物（不包括在试剂盒中）

o 7.1μL H2O（无核酸酶）

o 0.9μL实时引物混合物（每个引物5μM）

o 2.0μL DNA样本（来自上述QPCR的PCR产物）

▪ 对于8.2kb的标准曲线，以下优化的DNA浓度为

推荐：

o 2纳克/2μL H2O**

o 200 pg/2μL H2O

o 20 pg/2μL H2O

o 2 pg/2μL H2O

o 0.2 pg/2μL H2O

o 0.02 pg/2μL H2O

o 0页/2m1小时20分

**8.2kb实时标准

推荐的实时PCR程序

a） 50摄氏度2分钟

b） 95摄氏度10分钟

（程序40个c和d循环）

c） 95摄氏度15秒

d） 60摄氏度60秒

计算：

使用阈值循环值（CT）和DNA创建标准曲线

8.2kb标准品中每一个的浓度（对数标度）。使用线性回归

分析，根据您的CT值确定样本的DNA浓度

通过PCR获得。高水平的8.2kb产物代表较少的mtDNA损伤。

Detroit R&D整套DNA损伤分析试剂盒可用于人、大鼠或小鼠的血液、细胞或组织。由于缺失和链断裂造成的DNA损伤可以用此试剂盒检测，使用微板格式的DNA分离技术，该试剂盒可以很容易地用于高通量格式。在这方面，Detroit R&D研发分析是一个很有前途的工具，因为快速，操作简单，只需要少量的测试物质。