艾美捷Detroit R&D DNA损伤分析试剂盒，实时PCR定量

DNA损伤分析试剂盒，用于在体内和体外测量8.8 kb线粒体DNA的损伤，通过QPCR分析，对复制的DNA进行实时PCR定量：

艾美捷Detroit R&D DNA损伤分析试剂盒#DD2H、#DD2M、#DD2R 包含DNA聚合酶、QPCR引物和dNTPs，real-time PCR的引物，以及用于real-time PCR定量的8.8kb real-time PCR标准品(不包括SYBR Green master mix for real-time PCR)。重复分析20个样品（45个反应）。

整套试剂盒可用于人、大鼠或小鼠的血液、细胞或组织。由于缺失和链断裂造成的DNA损伤可以用此试剂盒检测，使用微板格式的DNA分离技术，该试剂盒可以很容易地用于高通量格式。在这方面，Detroit R&D研发分析是一个很有前途的工具，因为快速，操作简单，只需要少量的测试物质。  

DNA损伤分析试剂盒为基础研究和工业应用提供了强大的工具。这种创新的方法是基于在一个长（8.2-8.8 kb）的线粒体DNA片段上进行30个周期的定量PCR，然后使用实时PCR进行定量。    

左：实时PCR标准品扩增图；右：实时PCR分析8.8kb线粒体DNA的标准曲线

候选药物通常被生物转化为有活性的毒性代谢物，通过COX-2过氧化物酶活性破坏DNA。Comet和OxyDNA检测分别检测断裂DNA和氧化DNA。然而，候选药物形成的数千种不同的DNAs，无法用这种方法检测到。Detroit R&D开发了一种LQPCR检测方法，用于检测数千种不同候选药物引起的DNA损伤修复缺陷，着色性干皮病A组（XPA）人成纤维细胞系致敏DNA损伤发生的候选药物。表达COX-2的XPA细胞具有较强的COX-2催化活性。

LQPCR DNA损伤检测的应用实例：

用一种已知的COX-2激活的DNA损伤剂benzo(a)pyrene-7,8-dihydrodiol (BPD)，COX-2过氧化物酶活性的底物- tert-butyl hydroperoxide (t-BOOH)处理表达COX-2的XPA细胞。采用LQPCR分析DNA损伤。如上图柱状图所示，COX-2依赖性DNA损伤在BPD治疗后显著增加。   

除了细胞系统外，LQPCR DNA损伤测定还可用于新鲜或冷冻的组织或血液标本。因此，这种LQPCR DNA损伤试验不仅可以用于筛选细胞内的候选药物，也可以用于筛选体内的候选药物。