Flipper-TR探针研究——活细胞膜张力检测探针方案

Flipper-TR探针如何检测荧光寿命变化？

荧光Flipper-TR®探针通过特异性靶向细胞质膜，并通过其荧光寿命变化来反映膜张力变化。Flipper-TR®自发地插入细胞的质膜中，并且仅在插入脂质膜时才会激发荧光。探针通过机械载体上的两个扭曲的二硫噻吩之间的扭转角和J化改变来感知脂质双层膜结构的变化（参见图5）。当处于紧张状态时（二硫噻吩并排），发射寿命更长（4.1-8.0ns），而在松弛状态下（二硫噻吩扭曲），发射寿命短（2-4ns）。方差（cv）约为0.3ns（cv = 4-15％），这允许在分辨率细微变化的情况下进行高分辨率分析，在FLIM成像过程中，可将荧光寿命的差异通过时间来展示，一般来说，较短的寿命为绿色，中等寿命为黄色，较长的寿命为橙色和红色

Flipper-TR的结构和张力检测机制示意图

左边：Flipper-TR的基本分子结构

右边：Flipper-TR低张力时扭曲（绿色）和高张力时并列排布（红色）

这些探针的滤光片组件是什么？

Flipper-TR探针使用长分离滤光片组进行可视化，因为其激发峰值比发射峰值短100 nm以上。因此，理想的滤光片组是488 +/- 20nm的激发波长和575-675 +/- 40nm的发射波长（图3）。时间分辨测量方法允许非常低的背景，它在水性环境中具有低荧光。

Flipper-TR探针在诸如组织培养基或固定缓冲液等水环境中的背景非常低，因为它是*扭曲的状态，容易形成胶束并自我淬灭（参考文献3）。插入膜后，其扭曲度变小，开始发出高荧光。

艾美捷Flipper TR膜张力传感器为研究者们提供了一种快速测量体内膜张力变化的新颖、灵敏、可靠、无创的研究工具。