艾美捷 GFAP抗体（FC50001）操作事项

GFAP抗体（FC50001）背景：

GFAP抗体已经被广泛证实仅识别星形胶质细胞(astrocyte，也称astroglia)，而不识别神经细胞、成纤维细胞、少突胶质细胞(oligodendrocyte)以及肿瘤细胞等其它类型的细胞。因此GFAP抗体被广泛用于星形胶质细胞的免疫染色鉴定，也常用作星形胶质细胞Western检测时的参考检测以确认不同泳道的上样量是否相近。需要注意的是，GFAP在Schwann细胞和enteric glia中也可以被观察到。

艾美捷 GFAP抗体（FC50001）基本参数：

中文名称：GFAP抗体

英文名字：GFAP Antibody -W

cat#：FC50001

规格：200ul

应用类型：IHC

免疫原：这种抗体是多克隆抗体，在兔体内产生的肽序列是NAGFKETRASERAE（人、大鼠和小鼠），在注射到兔体内之前，用戊二醛将其与甲状腺球蛋白偶联。

来源宿主：兔

反应性：人，大鼠

保存建议：小瓶中含有约200微升1/100稀释液。 抗体可在BSA稀释液（50 mM KPBS、0.4%Triton、1%BSA、1%NGS）中进一步稀释至至少1/20，000。 抗体应在-20 ℃下储存。 还包括吸附有用于封闭的特异性肽的滤纸。 可向管中加入500 μ l稀释的抗体以获得10 μ M阻断。 应用于组织前，在室温（RT）下孵育至少1小时。 抗体特异性地与该肽阻断，而不与吸附在滤纸上的其他肽阻断。

GFAP抗体（FC50001）基本操作：

将新鲜冷冻的10-30微米切片在室温下固定在4%多聚甲醛（FA）中1小时磷酸盐缓冲盐水（PBS），并在PBS中与0.1-0.3%H2O2孵育10至30分钟。这个再次在PBS中洗涤组织，然后用Avidin/Biotin阻断试剂盒（Vector cat#SP-2001）处理，洗涤并在室温下用BSA稀释剂孵育1小时。将GFAP抗体（1/30000）应用于组织在室温下过夜。

在PBS中洗涤后，将切片在1/1000的生-物素化GAR中孵育（Vector labs cat#BA1000）在室温下1小时，洗涤，然后在阿维丁/生-物素中以1/1000（Vector labs cat#PK6100）在室温下1小时。洗涤后，用二氨基联苯胺（0.04%）在0.1M乙酸钠与0.06%H2O2混合六分钟（也可加入2.5%的氯化镍）。然后对切片进行水洗（如果需要，进行复染）、脱水并盖上盖子。

注意事项：

1. 在Western实验后，请注意回收稀释的抗体。回收的抗体在进行Western实验时至少可以重复使用10次。稀释后的抗体，包括已经使用过的稀释抗体，4℃保存。

2. 回收后重复使用的抗体，使用方法同新鲜稀释的抗体。如果在重复使用过程中发现抗体出现轻微混浊现象，可以10000g离心1-3分钟，取上清用于后续检测。如果回收的抗体出现明显的絮状物或长霉长菌等情况，则可以考虑废弃该抗体。