艾美捷核糖核酸酶 A（WBC-LS003435）详情介绍

核糖核酸酶 A物化性质：

物化性质 白色结晶或冻干粉，易溶于水，pI7.8，最适pH值7.7。稳定性：稳定 pH范围2-4.5，冷藏冻干粉或结冻的酶液可保存数年活力不变。抑制剂有脱氧核糖核酸(竞争性抑制剂)、变性脱氧核糖核酸(比天然的更有效)、 0.0005 mol/L Mg2+。酶反应：专一催化核糖核酸的核糖部分3'和5'磷酸二酯键的裂开，形成具有2'，3'-环磷酸衍生物寡聚核苷酸。

核糖核酸酶 A用途：

1、从 DNA：RNA 杂交体中去除未杂交的 RNA 区；

2、确定 RNA 或 DNA 中的单碱基突变的位置。在 RNA：DNA 或 RNA：RNA 杂交体中，若存在单碱基错，可用 RNAseA 识别并切割。通过凝胶电泳分析切割产物的大小，即可确定错配的位嚣；

3、RNA 检测。RNA 酶保护分析法是近年来发展起来的一种检测 RNA 的杂交技术；

4、降解 DNA 制备物中的 RNA 分子。

艾美捷核糖核酸酶 A（WBC-LS003435）在胞苷残基处的切割速度是尿苷残基的两倍（Richards和Wyckoff 1971）。Thr45被发现对介导嘧啶特异性最重要，既通过与嘧啶碱形成氢键，又在空间位上排除嘌呤碱（del Cardayré和Raines 1994）。Asp83的侧链对于稳定含尿苷底物裂解过程中的过渡态很重要;这种残留物对胞苷切割的动力学没有影响（del Cardayré和Raines 1995）。

RNase A对嘧啶核苷键具有特异性（Volkin和Cohn 1953）。反应被认为分两步进行。第一步，裂解3'，5'-磷酸二酯键，同时生成2'，3'-环磷酸二酯中间体。在第二步中，环磷酸二酯被水解成3'-单磷酸基团。第一步是关于底物的含氮碱的非特异性;然而，第二步对于末端为2'，3'-环磷酸盐的嘧啶核苷酸是绝对特异性的。RNase B与RNase A对环胞苷酸和酵母RNA具有相同的特异性（Plummer和Hirs 1963）。RNase A显示出对较大底物的偏好（Nogués等人，1995）。

应特别注意酶的处理，因为它与玻璃表面的亲和力。该酶保持活性，但在冻干时聚集，并在低离子强度的温度≥2°C的溶液中聚集。RNase A的加热溶液使DNA酶失活可能不令人满意，因为如果发生沉淀形成并且热处理的DNase可能会随着时间的推移重新激活，RNA酶活性可能会丧失。代码： RPDF 适用于需要最-低 DNase 和蛋白酶水平且无需进一步处理的应用。代码： RAF在某些应用中无需处理即可使用。要热处理 RAF，请使用 10mM 乙酸盐 pH 5.0 和或不带 15mM CaCl 2 在 15°C 或更长时间下在 100°C 下 80 分钟。 如果在中性pH下加热，可能会沉淀。代码的热处理：由于磷酸盐的存在，RASE会沉淀。  

核糖核酸酶 A部分引用文献：

Andini, S. , D'Alessio, G. , DiDonato, A. , Paolillo, L. , Piccoli, R. and Trivellone, E.

Comparative Proton NMR Studies of Bovine Semen and Pancreas Ribonucleases , Biochim Biophys Acta 742 , 530 , 1983

Anfinsen, C. and White, F.

The Ribonucleases , in The Enzymes Vol. 5 , (Boyer, P., Lardy, H., and Myerback, K., Eds.) , Academic Press, NY , 95 , 1961

Anfinsen, C. , Redfield, R. , Choate, W. , Page, J. and Carroll, W.

Studies on the Gross Structure, Cross-Linkages, and Terminal Sequences in Ribonuclease , J Biol Chem 207 , 201 , 1954