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艾美捷SouthernBiotech支原体检测试剂盒旨在专门检测细胞培养物中潜在的支原体污染。该试剂盒结合了聚合酶链反应(PCR)来扩增支原体内保守的16S核糖体RNA编码区基因组,从而提供了一种广泛、高灵敏度和高效的检测方法。仔细确定的引物序列三个属的支原体(支原体、无支原体和脲原体),使该试剂盒能够检测95%以上的潜在细胞培养物感染。
支原体检测试剂盒中的PCR技术快速(结果通常在不到3小时内获得)且易于使用。工具包也高度敏感,可在100µL测试样品上清液中检测到低至2-5毫微克的支原体DNA。真核生物的并且来自细胞培养上清液的细菌DNA不被试剂盒扩增。感染支原体的样本细胞系将在琼脂糖凝胶上产生约448bp至约611bp的PCR产物,具体取决于支原体的类型。包括阳性对照(M.orale,503bp),以验证PCR扩增过程具有以及确认在测试样品中获得的PCR产物的大小。还提供内部控制以消除与PCR抑制剂相关的潜在假阴性。
艾美捷支原体检测试剂盒建议的方案:
•试剂制备
o离心所有组件管,以确保材料完-全沉降到底部
o使用不含DNase的水重新配制底漆/dNTP混合物、阳性和内部对照,如下所示-
底漆/dNTP混合物-260µL
阳性对照-200µL
内部控制-200µL
o涡流5秒,以确保充分混合并在室温下平衡5分钟
o涡流,然后再次离心
o重组试剂应储存在-20°C或以下;避免多次冷冻/解冻循环
•样品制备
o将100μL细胞培养上清液*转移到无菌的200μL PCR管中;确保盖子密封严实,以防
蒸发
o将样品上清液在95°C下加热5分钟
o以最大速度快速旋转样品上清液5秒,以去除细胞碎片;上清液现在
准备加入PCR主混合物
*该试剂盒专为从细胞培养上清液中检测支原体而设计。对于血清或细胞裂解物样品,DNA
建议在测试前提取,以避免PCR抑制。
•热循环计划
•PCR主混合
•琼脂糖凝胶电泳
•凝胶评价
•如果样品的PCR被抑制,则可以通过进行DNA分析来轻松去除抑制剂
艾美捷支原体检测试剂盒样本数据:
相关文献:
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