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CUT&RUN技术PK Chip-seq丨艾美捷解析

时间:2021/10/20阅读:258
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  CUT&RUN(Cleavage Under Targets and Release Using Nuclease)在细胞内利用抗体靶向定位目标蛋白, 再由pA/G-微球菌核酸酶(Micrococcal nucleasel, MNase)对目标蛋白两端的DNA进行切割,从而将目标蛋白质-DNA复合物释放到细胞外。
 
  作为ChIP的高效替代方案, CUT&RUN技术在蛋白质-DNA研究中将会被越来越广泛地使用。以下为CUT&RUN与Chip-seq对比图:
 
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  图:分别对K-562细胞的H3K4me3和H3K27me3所结合的DNA进行测序,用于ChIP的细胞数量为2000万,用于 CUT&RUN的细胞数为50万。对测序结果进行分析,CUT&RUN有着卓丨越的灵敏度和信噪比,测序深度减少了10倍以上,细胞的需求减少了40倍。
 
  艾美捷 EpiGentek EpiNext CUT&RUN快速套件,以优惠价格从低输入提供无超声破碎,以可靠地识别真正的目标蛋白质富集区域并实现高分辨率定位。可满足用户快速富集蛋白质结合的DNA并绘制全基因组蛋白质/DNA相互作用的图谱的需求。
 
  EpiNext CUT&RUN快速套件包含执行测试所需的所有必要试剂从哺乳动物细胞或分离的细胞核/染色质开始成功切割和运行。在反应中,,细胞核是从细胞中分离出来的。靶蛋白DNA复合物与芯片级结合/捕获感兴趣的抗体。使用*的核酸裂解酶混合物,染色质片段化,目标蛋白质/DNA复合物两端的DNA序列劈开/移除。同时,目标蛋白占据的DNA序列不受影响。然后纯化和洗脱靶蛋白结合的DNA。富集的DNA可用于用各种方法分析蛋白质与DNA的相互作用,特别是下一代测序。试剂盒中包括阳性对照抗体(抗H3K9me3),阴性对照非免疫IgG,和对照染色质,可用于证明试剂盒的有效性和现场性能PCR/生物分析仪步骤。
 

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