【温馨提示】细胞用途：只可用于科研，不可用于临床诊断和治疗。
1.产品名称：兔骨内膜间充质干细胞操作步骤
2.组织来源：股骨、胫骨组织
3.产品规格：5×10^5cells/T25细胞培养瓶
4.细胞简介：
兔骨内膜间充质干细胞分离自股骨、胫骨；骨内膜是一层致密结缔组织膜，覆盖在骨的表面（关节面除外），新鲜骨内膜呈粉红色，含有丰富的血管、神经和成骨细胞。此外，附着于骨的肌腱、韧带于附着部位都与骨内膜编织在一起。因而骨内膜与骨质结合甚为牢固。骨内膜富含血管、神经，通过骨质的滋养孔分布于骨质和骨髓。骨内膜分内、外两层，外层主要是粗大的胶原纤维束，部分纤维穿入骨质，使骨内膜固定于骨面；内层疏松，含成骨细胞和破骨细胞（分别具有产生新骨质和改建骨的功能）。骨髓腔和骨松质的网眼也衬着一层菲薄的结缔组织膜，叫做骨膜。骨内膜的内层和骨膜有分化成骨细胞和破骨细胞的能力，以形成新骨质和破坏、改造已生成的骨质，所以对骨的发生、生长、修复等具有重要意义。骨内膜间充质干细胞是一种具有高度自我更新能力和多向分化潜能的干细胞，可以向骨、软骨、肌组织、皮肤、脂肪、神经等多种组织分化，因此可以作为组织工程中的种子细胞。骨内膜间充质干细胞的体外培养条件要求较高，在培养过程中，受贴壁时间、种植密度、血清含量、培养温度和培养基pH值等条件的影响。
本公司的兔骨内膜间充质干细胞采用冲洗骨髓、消化骨内膜、差速贴壁法结合培养基筛选制备而来，细胞总量约为5×10^5cells/瓶；细胞经CD90/CD44、CD34/CD45免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
5.培养基信息：
DMEM-F12、FBS、间充质干细胞生长添加剂、Glutamine、Penicillin、Streptomycin等
冷冻保存方法一：冷冻管置于4℃300分钟→(-20℃30分钟*)→-80℃16~18小时(或隔夜)→液氮槽*储存。
冷冻保存方法二：冷冻管置于已设定程序之可程序降温机中每分钟降1-3℃至–80℃以下，再放入液氮槽期储存。-20℃不可超过1小时，以防止冰晶过大，造成细胞大量死亡，也可跳过此步骤直接放入-80℃冰箱中，但存活率稍微降低一些。
操作步骤：
一．培养基及培养冻存条件准备：
1、准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640:GIBCO,货号31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸钠 0.11g/L)，90%；优质胎牛血清，10%。
2、培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。
3、冻存液：90%*培养基，10%DMSO，现用现配。液氮储存。
二、细胞处理：
1、复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。
2、细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
1)弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2)加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3)按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。
4)将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
优势：
1、细胞株种类齐全，包括肿瘤细胞、正常细胞、耐药细胞株，如：人滑膜细胞，人胃癌细胞，人细胞，人肾近曲小管上皮细胞，肝癌细胞，心肌细胞，子宫内膜细胞等
2、*，专业的细胞培养技术指导
3、购买本公司的细胞株，免费复苏
4、客户收到细胞后一天回传细胞图片，三天回传细胞生长状态图片，五天内有问题公司负责重发，超过五天时限至一个月内重发细胞收半价，超过一个月重发全额收费。
5、经济、实惠、可靠，完善、稳定的实验体系，优秀的科研队伍，*的实验设备、准确可靠的实验结果，是您可靠的合作伙伴
6、此外，我们还可以提供Elisa试剂盒、细胞株、抗体、血清、培养基、常用生化试剂、耗材。
碱性磷酸酶（AP）标记的小鼠抗牛IgG ECE1(Endothelin Converting Enzyme 1)
胶体金标记的小鼠抗牛IgG ECE2(Endothelin Converting Enzyme 2)
Cy3标记的小鼠抗牛IgG ECP(eosinophil cationic protein)mouse rat
辣根过氧化物酶标记的小鼠抗牛IgG ED-1 (Ectodermal Dysplasia 1)
*标记的小鼠抗牛IgG EGFL7(EGF-like domain containing protein 7)
*标记的小鼠抗豚鼠IgG Egr-1(Early growth response 1)
胶体金标记的小鼠抗豚鼠IgG phospho-eIF4E(pSer209)(phospho-Eukaryotic translation initiation factor 4E)
辣根过氧化物酶标记的小鼠抗豚鼠IgG ELK1
PE-CY5标记的小鼠抗豚鼠IgG Elastin
APC标记的小鼠抗豚鼠IgG ELAVL1/HuR peptide
Alexa Fluor 350标记的小鼠抗豚鼠IgG Emp1 (epithelial membrane protein 1)
Alexa Fluor 488标记的小鼠抗豚鼠IgG sFRP-4(Secreted frizzled-related protein 4; Frizzled protein, human endometrium)
Alexa Fluor 555标记的小鼠抗豚鼠IgG Endostatin
Alexa Fluor 647标记的小鼠抗豚鼠IgG E.coli O6 (Escherichia coli O6)
PE-Cy5.5标记的小鼠抗豚鼠IgG EPEC/E.coli(enteropathogenic E．coli，EPEC)
碱性磷酸酶（AP）标记的小鼠抗豚鼠IgG EphA1 R(Ephrin A1 Receptor)
FITC标记的小鼠抗豚鼠IgG EPOR peptide
Cy3标记的小鼠抗豚鼠IgG phospho-ERK1/MAPK-1/2(pThr183 + pTyr185)
Cy5标记的小鼠抗豚鼠IgG ERK(Extracellular signal-regulated kinase)
Cy5.5标记的小鼠GSTs(Human glutathione S-transferases) ELISA Kit 人*S转移酶 48T
DUB(Human deubiquitinating enzyme) ELISA Kit 人泛素分解酶 48T
sPLA2(Human secreted phospholipase A2) ELISA Kit 人分泌型磷脂酶A2 48T
E3/UBPL(Human E3/ubiquitin-protein ligase) ELISA Kit 人泛素连接酶 48T
MCT(Human mast cell tryptase) ELISA Kit 人肥大细胞类* 48T
DT(Human dopachrome tautomerase) ELISA Kit 人多巴色素异构酶 48T
E2/UBCE(Human E2/ubiquitin-conjugating enzyme) ELISA Kit 人泛素结合酶 48T
PDI(Human protein disulfide isomerase) ELISA Kit 人蛋白质二硫键异构酶 48T
CAD(Human caspase activated deoxyribonuclease0 ELISA Kit 人胱天蛋白酶激活的脱氧核糖核酸酶 48T
Gamma-ECS(Human Gamma-glutamyl systeine synthetase) ELISA Kit 人γ谷氨酰半*合成酶 48T
E1/UBAE(Human E1/ubiquitin-activating enzyme) ELISA Kit 人泛素激活酶 48T
PP(Human Pepsin) ELISA Kit 人* 48T
HK(Human Hexokinase) ELISA Kit 人己糖激酶 48T
PDH E1(Human pyruvate dehydrogenase-E1) ELISA Kit 人丙酮酸脱氢酶E1 48T
GSK(Human glycogen synthase kinase) ELISA Kit 人糖原合成酶激酶 48T
Casp-9(Human Caspase-9) ELISA Kit 人胱天蛋白酶9 48T
Casp-3(Human Caspase 3) ELISA Kit 人胱天蛋白酶3 48T
NE(Human neutrophil elastase) ELISA Kit 人中
抗豚鼠IgG MAPK1/ERK3 (Mitogen-activated protein kinase 3; P44MAPK)
