1.产品名称：小鼠肺成纤维细胞实验方法
2.组织来源：肺组织
3.产品规格：5×10^5cells/T25细胞培养瓶
4.细胞简介：
小鼠肺成纤维细胞分离自肺组织；肺是机体的呼吸器官，位于胸腔，左右各一，覆盖于心之上。肺有分叶，左二右三，共五叶。肺经肺系（指气管、支气管等）与喉、鼻相连，故称喉为肺之门户，鼻为肺之外窍。成纤维细胞（Fibroblast）是疏松结缔组织的主要细胞成分，由胚胎时期的间充质细胞分化而来；成纤维细胞较大，轮廓清楚，多为突起的纺锤形或星形的扁平状结构，其细胞核呈规则的卵圆形，核仁大而明显。成纤维细胞功能活动旺盛，细胞质嗜弱碱性，具明显的蛋白质合成和分泌活动，在一定条件下，它可以实现跟纤维细胞的互相转化；成纤维细胞对不同程度的细胞变性、坏死和组织缺损的修复有着十分重要的作用。刚分离的肺成纤维细胞呈圆形、折光性良好，悬浮于培养基中。30min细胞贴壁，其中部分开始伸出伪足，表现为小的突起；6h后细胞基本贴壁*，伸展成梭形，胞核清晰，分布较均匀，散在生长，不聚集成团；细胞生长迅速，5-7天即呈融合状态，细胞排列紧密，有的交叉重叠生长，平坦、胞体较大，细胞质透明，细胞核较大，呈椭圆形，颜色淡。细胞融合，并彼此连接成网状；细胞呈突起的纺锤形或星形的扁平分布。肺成纤维细胞在生理条件下的主要功能包括：构造和维持肺器官的正常形态，合成和释放细胞外基质以及组织损伤后及时大量聚集修复损伤组织。
本公司的小鼠肺成纤维细胞采用*-胶原酶混合消化法结合差速贴壁法制备而来，细胞总量约为5×10^5cells/瓶；细胞经Vimentin免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
5.培养基信息：
DMEM[H]、FBS、成纤维细胞生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等
优势：
1、细胞株种类齐全，包括肿瘤细胞、正常细胞、耐药细胞株，如：人滑膜细胞，人胃癌细胞，人细胞，人肾近曲小管上皮细胞，肝癌细胞，心肌细胞，子宫内膜细胞等
2、*，专业的细胞培养技术指导
3、购买本公司的细胞株，免费复苏
4、客户收到细胞后一天回传细胞图片，三天回传细胞生长状态图片，五天内有问题公司负责重发，超过五天时限至一个月内重发细胞收半价，超过一个月重发全额收费。
5、经济、实惠、可靠，完善、稳定的实验体系，优秀的科研队伍，*的实验设备、准确可靠的实验结果，是您可靠的合作伙伴
6、此外，我们还可以提供Elisa试剂盒、细胞株、抗体、血清、培养基、常用生化试剂、耗材。
操作步骤：
一．培养基及培养冻存条件准备：
1、准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640:GIBCO,货号31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸钠 0.11g/L)，90%；优质胎牛血清，10%。
2、培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。
3、冻存液：90%*培养基，10%DMSO，现用现配。液氮储存。
二、细胞处理：
1、复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。
2、细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
1)弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2)加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3)按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。
4)将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
冷冻保存方法一：冷冻管置于4℃300分钟→(-20℃30分钟*)→-80℃16~18小时(或隔夜)→液氮槽*储存。
冷冻保存方法二：冷冻管置于已设定程序之可程序降温机中每分钟降1-3℃至–80℃以下，再放入液氮槽期储存。-20℃不可超过1小时，以防止冰晶过大，造成细胞大量死亡，也可跳过此步骤直接放入-80℃冰箱中，但存活率稍微降低一些。
【温馨提示】细胞用途：只可用于科研，不可用于临床诊断和治疗。
法) CLIA Kit for Concanavalin A (ConA) 96T Y17175 General
抗*(AT)检测试剂盒(化学发光免疫分析法) CLIA Kit for Antithrombin (AT) 96T Y17176 Homo sapiens (Human)
绒毛膜*(CG)检测试剂盒(化学发光免疫分析法) CLIA Kit for Chorionic Gonadotropin (CG) 96T Y17177 Homo sapiens (Human)
外异蛋白A2受体(EDA2R)检测试剂盒(化学发光免疫分析法) CLIA Kit for Ectodysplasin A2 Receptor (EDA2R) 96T Y17178 Homo sapiens (Human)
磷脂酰肌醇聚糖F(PIGF)检测试剂盒(化学发光免疫分析法) CLIA Kit for Phosphatidylinositol Glycan F (PIGF) 96T Y17179 Homo sapiens (Human)
肾母细胞瘤蛋白1(WT1)检测试剂盒(化学发光免疫分析法) CLIA Kit for Wilms Tumor Protein (WT1) 96T Y17180 Homo sapiens (Human)
D-氨基酸氧化酶激活因子(DAOA)检测试剂盒(化学发光免疫分析法) CLIA Kit for D-amino Acid Oxidase Activator (DAOA) 96T Y17181 Homo sapiens (Human)
D-氨基酸氧化酶(DAO)检测试剂盒(化学发光免疫分析法) CLIA Kit for D-Amino Acid Oxidase (DAO) 96T Y17182 Homo sapiens (Human)
Ⅹ型胶原(COL10)检测试剂盒(化学发光免疫分析法) CLIA Kit for Collagen Type X (COL10) 96T Y17183 Homo sapiens (Human)
*(化学发光免疫分析法) CLIA Kit for Anti Mullerian Hormone (AMH) 96T Y17184 Homo sapiens (Human)
POTE锚蛋白域家族成员G(POTEG)检测试剂盒(化学发光免疫分析法) CLIA Kit for POTE Ankyrin Domain Family, Member G (POTEG) 96T Y17185 Homo sapiens (Human)
磷酸*性磷酸酶(PSPH)检测试剂盒(化学发光免疫分析法) CLIA Kit for Phosphoserine Phosphatase (PSPH) 96T Y17186 Homo
0.2ml
Anti-JNK1/3 /FITC 荧光素标记c-Jun氨基末端激酶1/3抗体IgG 0.2ml
Anti-Jun B/FITC 荧光素标记活化蛋白激酶B抗体IgG 0.2ml
Anti-Jun D/FITC 荧光素标记活化蛋白激酶D抗体IgG 0.2ml
Anti-p-Klf5/CKLF /FITC 荧光素标记磷酸化肠道内富含的Kruppel样因子5抗体IgG 0.2ml
Anti-p-Kinesin 5B/FITC 荧光素标记磷酸化 Kinesin 5B 抗体IgG 0.2ml
Anti-phospho-Syndecan 4/FITC 荧光素标记抗磷酸化多配体聚糖4抗体IgG 0.2ml
Anti-KGFR/FGFR2/RBITC 红色罗丹明标记角质形成细胞生长因子受体/成纤维细胞生长因子受体2抗体IgG 0.2ml
Anti-KiSS-1R/GPR54/GPCR54/FITC 荧光素标记G蛋白偶联受体54抗体IgG 0.2ml
Anti-Ki-67/FITC 荧光素标记Ki-67 Antigen抗体IgG 0.2ml
Anti-Ki-67/FITC 荧光素标记Ki-67 Antigen抗体IgG 0.2ml
Anti-Kif14 protein /FITC 荧光素标记驱动蛋白家族Member14蛋白抗体IgG 0.2ml
Anti-Kiss-1/FITC 荧光素标记肿瘤转移抑制基因抗体IgG 0.2ml
Anti-KIF17/FITC 荧光素标记驱动蛋白家族KIF17抗体IgG 0.2ml
Anti-PFK2/PFKFB3 /FITC 荧光素标记6磷酸果糖激酶2抗体IgG 0.2ml
Anti-Phospho-PFK2 (Ser466) /FITC 荧光素标记磷酸化6磷酸果糖激酶2抗体IgG 0.2ml
Anti-KLF2/FITC 荧光素标记兔抗人、大、小鼠肠道内富含的Kruppel样因子/上皮锌指蛋白2抗体IgG 0.2ml
Anti-Klf4/FITC 荧光素标记肠道内富含的Kruppel样因子/上皮锌指蛋白K抗体IgG 0.2ml
Anti-KLF5/FITC 荧光素标记肠道内富含的Kruppel样因子5抗体IgG 0.2ml
Anti-KLF6/FITC 荧光素标记转染抑癌基因KLF6抗体
