【温馨提示】细胞用途：只可用于科研，不可用于临床诊断和治疗。
1.产品名称：大鼠角膜成纤维细胞操作步骤
2.组织来源：眼角膜组织
3.产品规格：5×10^5cells/T25细胞培养瓶
4.细胞简介：
大鼠角膜成纤维细胞分离自眼角膜组织；角膜位于眼球前壁的一层透明膜，约占纤维膜的前1/6，从后面看角膜呈正圆形，从前面看为横椭圆形。角膜厚度各部分不尽相同，*部zui薄。角膜有十分敏感的神经末梢，如有外物接触角膜，眼睑便会不由自主地合上以保护眼睛。为了保持透明，角膜并没有血管，透过外界空气、泪液及房水获取养份及氧气。角膜分为五层，由前向后依次为：上皮细胞层、前弹力层、基质层、后弹力层、内皮细胞层。成纤维细胞（Fibroblast）是疏松结缔组织的主要细胞成分，由胚胎时期的间充质细胞分化而来。成纤维细胞较大，轮廓清楚，多为突起的纺锤形或星形的扁平状结构，其细胞核呈规则的卵圆形，核仁大而明显。成纤维细胞功能活动旺盛，细胞质嗜弱碱性，具明显的蛋白质合成和分泌活动，在一定条件下，它可以实现跟纤维细胞的互相转化；成纤维细胞对不同程度的细胞变性、坏死和组织缺损的修复有着十分重要的作用。刚分离的角膜成纤维细胞呈圆形、折光性良好，悬浮于培养基中。30min细胞贴壁，其中部分开始伸出伪足，表现为小的突起；6h后细胞基本贴壁*，伸展成梭形，胞核清晰，分布较均匀，散在生长，不聚集成团；细胞生长迅速，5-7天即呈融合状态，细胞排列紧密，有的交叉重叠生长，平坦、胞体较大，细胞质透明，细胞核较大，呈椭圆形，颜色淡。细胞融合，并彼此连接成网状；细胞呈突起的纺锤形或星形的扁平分布。角膜成纤维细胞在生理条件下的主要功能包括：构造和维持角膜的正常形态，合成和释放细胞外基质以及组织损伤后及时大量聚集修复损伤组织。
本公司的大鼠角膜成纤维细胞采用*-胶原酶混合消化法结合差速贴壁法制备而来，细胞总量约为5×10^5cells/瓶；细胞经Vimentin免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
5.培养基信息：
DMEM[H]、FBS、成纤维细胞生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等
冷冻保存方法一：冷冻管置于4℃300分钟→(-20℃30分钟*)→-80℃16~18小时(或隔夜)→液氮槽*储存。
冷冻保存方法二：冷冻管置于已设定程序之可程序降温机中每分钟降1-3℃至–80℃以下，再放入液氮槽期储存。-20℃不可超过1小时，以防止冰晶过大，造成细胞大量死亡，也可跳过此步骤直接放入-80℃冰箱中，但存活率稍微降低一些。
操作步骤：
一．培养基及培养冻存条件准备：
1、准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640:GIBCO,货号31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸钠 0.11g/L)，90%；优质胎牛血清，10%。
2、培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。
3、冻存液：90%*培养基，10%DMSO，现用现配。液氮储存。
二、细胞处理：
1、复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。
2、细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
1)弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2)加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3)按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。
4)将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
优势：
1、细胞株种类齐全，包括肿瘤细胞、正常细胞、耐药细胞株，如：人滑膜细胞，人胃癌细胞，人细胞，人肾近曲小管上皮细胞，肝癌细胞，心肌细胞，子宫内膜细胞等
2、*，专业的细胞培养技术指导
3、购买本公司的细胞株，免费复苏
4、客户收到细胞后一天回传细胞图片，三天回传细胞生长状态图片，五天内有问题公司负责重发，超过五天时限至一个月内重发细胞收半价，超过一个月重发全额收费。
5、经济、实惠、可靠，完善、稳定的实验体系，优秀的科研队伍，*的实验设备、准确可靠的实验结果，是您可靠的合作伙伴
6、此外，我们还可以提供Elisa试剂盒、细胞株、抗体、血清、培养基、常用生化试剂、耗材。
疫分析法) CLIA Kit for Chemokine C-Motif Ligand 2 (XCL2) 96T Y17807 Homo sapiens (Human)
VEGF共调节趋化因子1(VCC1)检测试剂盒(化学发光免疫分析法) CLIA Kit for VEGF Co Regulated Chemokine 1 (VCC1) 96T Y17808 Homo sapiens (Human)
VEGF共调节趋化因子1(VCC1)检测试剂盒(化学发光免疫分析法) CLIA Kit for VEGF Co Regulated Chemokine 1 (VCC1) 96T Y17809 Mus musculus (Mouse)
VEGF共调节趋化因子1(VCC1)检测试剂盒(化学发光免疫分析法) CLIA Kit for VEGF Co Regulated Chemokine 1 (VCC1) 96T Y17810 Rattus norvegicus (Rat)
白细胞介素24(IL24)检测试剂盒(化学发光免疫分析法) CLIA Kit for Interleukin 24 (IL24) 96T Y17811 Homo sapiens (Human)
白细胞介素24(IL24)检测试剂盒(化学发光免疫分析法) CLIA Kit for Interleukin 24 (IL24) 96T Y17812 Mus musculus (Mouse)
白细胞介素24(IL24)检测试剂盒(化学发光免疫分析法) CLIA Kit for Interleukin 24 (IL24) 96T Y17813 Rattus norvegicus (Rat)
白介素20(IL20)检测试剂盒(化学发光免疫分析法) CLIA Kit for Interleukin 20 (IL20) 96T Y17814 Homo sapiens (Human)
白介素29(IL29)检测试剂盒(化学发光免疫分析法) CLIA Kit for Interleukin 29 (IL29) 96T Y17815 Homo sapiens (Human)
白介素22(IL22)检测试剂盒(化学发光免疫分析法) CLIA Kit for Interleukin 22 (IL22) 96T Y17816 Homo sapiens (Human)
白介素22(IL22)检测试剂盒(化学发光免疫分析法) CLIA Kit for Interleukin 22 (IL22) 96T Y17817 Mus musculus (Mouse)
生长分化因子15(GDF15)检测试剂盒(化学发光免疫分析法) CLIA Kit for Growth Differentiation Factor 15 (GDF15) 96T Y17818 Homo sapiens (Human)
磷酸化血管生成素受体2抗体IgG 0.2ml
Anti-TIEG1/KLF10/FITC 荧光素标记TGF-β诱导早期应答基因1抗体IgG 0.2ml
Anti-RALDH2/FITC 荧光素标记*脱氢酶2型抗体IgG 0.2ml
anti-RARRES1/TIG1/FITC 荧光素标记*受体应答蛋白1抗体IgG 0.2ml
Anti-TIGAR humen/FITC 荧光素标记兔抗人TIGAR蛋白抗体IgG 0.2ml
anti-Rarres2/TIG2/FITC 荧光素标记*受体应答蛋白2抗体IgG 0.2ml
Anti-Rarres3/TIG3/Chemerin/FITC 荧光素标记*受体应答蛋白3抗体IgG 0.2ml
Anti-rInsulin /HRP 辣根过氧化物酶标记抗*抗体IgG 0.2ml
Anti-rInsulin /FITC 荧光素标记抗*抗体IgG 0.2ml
Anti-rInsulin human monoclonal/FITC 荧光素标记小鼠*单克隆抗体IgG 0.2ml
Anti-rInsulin monoclonal (pig)/FITC 荧光素标记小鼠抗胰岛素单克隆抗体（猪）IgG 0.2ml
Anti-TIMP-1/FITC 荧光素标记金属蛋白酶组织抑制因子-1抗体IgG 0.2ml
Anti-TIMP-2/FITC 荧光素标记金属蛋白酶组织抑制因子-2抗体IgG 0.2ml
Anti-TIMP-3/FITC 荧光素标记金属蛋白酶组织抑制因子-3抗体IgG 0.2ml
Anti-TIMP-4/FITC 荧光素标记金属蛋白酶组织抑制因子-4抗体IgG 0.2ml
Anti-TIF1 Alpha/TRIM24/FITC 荧光素标记转录中介因子Tif1α抗体IgG 0.2ml
Anti-TIF1 beta/KAP1/FITC 荧光素标记转录中介因子Tif1β抗体IgG 0.2ml
Anti-Phospho-TIF1beta (Ser824)/FITC 荧光素标记磷酸化转录中介因子Tif1β抗体IgG 0.2ml
Anti-TLK1/FITC 荧光素标记调节染色体组装激酶1抗体IgG 0.2ml
Anti-Phospho-TLK1 (Ser695)/FITC 荧光素标记磷
