【温馨提示】细胞用途：只可用于科研，不可用于临床诊断和治疗。
1.产品名称：人肺动脉成纤维细胞操作步骤
2.组织来源：肺动脉组织
3.产品规格：5×10^5cells/T25细胞培养瓶
4.细胞简介：
人肺动脉成纤维细胞分离自肺动脉组织；肺动脉亦称肺动脉干。在呼吸空气的脊椎动物中，把静脉血由心脏导向肺脏的动脉。肺大动脉起于右心室，在主动脉之前向左上后方斜行，在主动脉弓下方分为左、右肺动脉，经肺门入肺。肺动脉干位于心包内，为一粗短的动脉干。起自右心室，在升主动脉前方向左后上方斜行，至主动脉弓下方分为左、右肺动脉。左肺动脉较短，在左主支气管前方横行，分二支进入左肺上、下叶。右肺动脉较长而粗，经升主动脉和上腔静脉后方向右横行，至右肺门处分为三支进入右肺上、中、下叶。成纤维细胞（Fibroblast）是疏松结缔组织的主要细胞成分，由胚胎时期的间充质细胞分化而来；成纤维细胞较大，轮廓清楚，多为突起的纺锤形或星形的扁平状结构，其细胞核呈规则的卵圆形，核仁大而明显。成纤维细胞功能活动旺盛，细胞质嗜弱碱性，具明显的蛋白质合成和分泌活动，在一定条件下，它可以实现跟纤维细胞的互相转化；成纤维细胞对不同程度的细胞变性、坏死和组织缺损的修复有着十分重要的作用。刚分离的肺动脉成纤维细胞呈圆形、折光性良好，悬浮于培养基中。30min细胞贴壁，其中部分开始伸出伪足，表现为小的突起；6h后细胞基本贴壁*，伸展成梭形，胞核清晰，分布较均匀，散在生长，不聚集成团；细胞生长迅速，5-7天即呈融合状态，细胞排列紧密，有的交叉重叠生长，平坦、胞体较大，细胞质透明，细胞核较大，呈椭圆形，颜色淡。细胞融合，并彼此连接成网状；细胞呈突起的纺锤形或星形的扁平分布。肺动脉成纤维细胞在生理条件下的主要功能包括：构造和维持肺动脉的正常形态；合成和释放细胞外基质；组织损伤后及时大量聚集修复损伤组织。
本公司的肺动脉成纤维细胞采用*-胶原酶混合消化法结合差速贴壁法制备而来，细胞总量约为5×10^5cells/瓶；细胞经Vimentin免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
5.培养基信息：
DMEM[H]、FBS、成纤维细胞生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等
冷冻保存方法一：冷冻管置于4℃300分钟→(-20℃30分钟*)→-80℃16~18小时(或隔夜)→液氮槽*储存。
冷冻保存方法二：冷冻管置于已设定程序之可程序降温机中每分钟降1-3℃至–80℃以下，再放入液氮槽期储存。-20℃不可超过1小时，以防止冰晶过大，造成细胞大量死亡，也可跳过此步骤直接放入-80℃冰箱中，但存活率稍微降低一些。
操作步骤：
一．培养基及培养冻存条件准备：
1、准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640:GIBCO,货号31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸钠 0.11g/L)，90%；优质胎牛血清，10%。
2、培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。
3、冻存液：90%*培养基，10%DMSO，现用现配。液氮储存。
二、细胞处理：
1、复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。
2、细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
1)弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2)加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3)按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。
4)将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
优势：
1、细胞株种类齐全，包括肿瘤细胞、正常细胞、耐药细胞株，如：人滑膜细胞，人胃癌细胞，人细胞，人肾近曲小管上皮细胞，肝癌细胞，心肌细胞，子宫内膜细胞等
2、*，专业的细胞培养技术指导
3、购买本公司的细胞株，免费复苏
4、客户收到细胞后一天回传细胞图片，三天回传细胞生长状态图片，五天内有问题公司负责重发，超过五天时限至一个月内重发细胞收半价，超过一个月重发全额收费。
5、经济、实惠、可靠，完善、稳定的实验体系，优秀的科研队伍，*的实验设备、准确可靠的实验结果，是您可靠的合作伙伴
6、此外，我们还可以提供Elisa试剂盒、细胞株、抗体、血清、培养基、常用生化试剂、耗材。
唾液*α1(AMY1)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
胰弹性蛋白酶(ELA1)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
成骨生长肽(OGP)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
白介素1α(IL1α)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
硫氧化还原蛋白(Trx)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
硫氧化还原蛋白(Trx)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
硫氧化还原蛋白(Trx)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
硫氧还蛋白还原酶1(TrxR1)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
硫氧还蛋白还原酶1(TrxR1)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
硫氧还蛋白还原酶1(TrxR1)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
孤啡肽(OFQ)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
孤啡肽(OFQ)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
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基质金属蛋白酶1(MMP1)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
内凝集蛋白1(ITLN1)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
内凝集蛋白1(ITLN1)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
内凝集蛋白1(ITLN1)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
载脂蛋白E(APOE)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
载脂蛋白E(APOE)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
载脂蛋白E(APOE)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
0.5mg
Ferritin peptide 铁蛋白抗原 ADAMTS8 整合素样金属蛋白酶与*8型抗体 0.5mg
Cytochrome C 细胞色素 C（抗原） PRRSV M protein 猪蓝耳病病毒M蛋白抗体 0.5mg
ADRB3/ Beta3-AR ( Beta3-adrenergic receptor) 肾上腺素能受体β3 CPN10 叶绿体伴侣蛋白抗体（苹果） 0.5mg
Cytomegalovirus (CMV)PP65 细胞巨化病毒(多肽) FMDV Polyprotein (3D polymerase) 口蹄疫病毒 0.5mg
DDC (DOPA decarboxylase) 多巴胺脱羧酶（抗原） Clenbuterol Hydrochloride(Spiropent) */瘦肉精抗体 0.5mg
EGFR- V III 人表皮生长因子受体-8（多肽片断抗原） Chloramphenicol *抗体 0.5mg
Alpha-AF/ Alpha-Afa(alpha-L-arabinofuranosidase) α-L-阿拉伯呋喃糖苷酶抗原 ADAR1 (N-terminus) 双链RNA腺苷酸脱氨基酶抗体（N端） 0.5mg
SCCA peptide 鳞状细胞癌抗原 BRLF1 立即早期癌基因BRLF1抗体（鼻咽癌基因） 0.5mg
Endothelin-1 内皮素-1(多肽抗原) ADAR1 (C-terminus) 双链RNA腺苷酸脱氨基酶抗体（C端） 0.5mg
Endothelin-1 (ET-1) 内皮素-1（抗原） Ractopamine /PAYLEAN (1B12) 小鼠抗莱克多巴胺单克隆抗体 0.5mg
ERAB 内质网Aβ相关结合蛋白（抗原） Cellulase 纤维素酶 0.5mg
ER-Alpha peptide 雌激素受体（多肽抗原） Pectinesterase 果胶酶抗体 0.5mg
TIMP-1(Tissue Inhibitor of Metalloproteinase-1) 金属蛋白酶组织抑制因子-1（抗原） DLK1/Delta/DLL1 (C-terminus) 穿膜蛋白DLK1抗体（C端） 0.5mg
ER-Alpha/ Beta Estrpgen Receptor Alpha/ Beta 雌激素受体（抗原） ADD1/alpha Adducin 内收蛋白a1抗体 0.5mg
ER- Beta (Estrogen receptor beta)peptide 雌激
