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即用型评板培养基标准操作要点

阅读:123发布时间:2018-04-02

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即用型评板培养基标准操作要点
1. 标本的采取和保存
大部分ELISA 检测均以血清为标本。血清标本可按常规方法采集,应注意避免溶血,红细胞溶解时会释放出具有过氧化物酶活性的物质,以HRP 为标记的ELISA 测定中,溶血标本可能会增加非特异性显色。血清标本宜在新鲜时检测。如有细菌污染,菌体中可能含有内源性HRP,也会产生假阳性反应。一般说来,在5 天内测定的血清标本可放置于4℃,标本在冰箱中保存时间过长导致血清IgG 聚合,使间接法的试剂本底加深。超过一周测定的需-20℃保存。冻结血清融解后,蛋白质局部浓缩,分布不均,应充分混匀并避免产生气泡。混浊或有沉淀的血清标本应先离心或过滤,澄清后再检测。反复冻融会使抗体效价跌落,所以测抗体的血清标本如需保存作多次检测,宜少量分装冰存。保存血清自采集时就应注意无菌操作,也可加入适当防腐剂。抗凝不*的标本因纤维蛋白原的干扰而造成假阳性,建议尽量不用抗凝血尤其是肝素抗凝剂。
2.加样
加样时应将所加物加在ELISA 板孔的底部,避免加在孔壁上部,并注意不可溅出。
3.保温
在建立ELISA 方法作反应动力学研究时,实验表明,两次抗原抗体反应一般在37℃经
1-2 小时,产物的生成可达。为避免蒸发,板上应加盖,也可用塑料贴封纸或保鲜膜覆盖板孔,反应板不宜叠放,以保证各板的温度都能迅速平衡。应注意温育的温度和时间应按规定力求准确。由于公司的试剂盒温育是在空气浴中完成,采用水浴会造成值偏高或花板。另外温育中还有边缘效应,边上的值会偏高,建议为了客观的判断结果,将质控放在非边缘位置。
4.洗涤
洗涤在ELISA 过程中虽不是一个反应步骤,但却决定着实验的成败。ELSIA 就是靠洗涤来达到分离游离的和结合的酶标记物的目的。通过洗涤以清除残留在板孔中没能与固相抗原或抗体结合的物质,以及在反应过程中非特异性地吸附于固相载体的干扰物质。聚苯乙烯等塑料对蛋白质的吸附是普遍性的,而在洗涤时应把这种非特异性吸附的干扰物质洗涤下来。可以说在ELISA 操作中,洗涤是zui主要的关键技术,应引起操作者的高度重视,操作者应严格按要求洗涤,不得马虎。
洗涤液多为含非离子型洗涤剂的中性缓冲液。聚苯乙烯载体与蛋白质的结合是疏水性的,非离子型洗涤剂既含疏水基团,也含亲水基团,其疏水基团与蛋白质的疏水基团借疏水键结合,从而削弱蛋白质与固相载体的结合,并借助于亲水基团和水分子的结合作用,使蛋白质回复到水溶液状态,从而脱离固相载体。洗涤液中的非离子型洗涤剂一般是吐温20,其浓度可在0.05%-0.2%之间,高于0.2%时,可使包被在固相上的抗原或抗体解吸附而减低试验的灵敏度。
即用型评板培养基成纤维细胞生长因子7(FGF7)ELISA试剂盒    ,英文名:    FGF7 ELISA Kit
成纤维细胞生长因子5(FGF5)ELISA试剂盒    ,英文名:    FGF5 ELISA Kit
成纤维细胞生长因子3(FGF3)ELISA试剂盒    ,英文名:    FGF3 ELISA Kit
成纤维细胞生长因子21(FGF21)ELISA试剂盒    ,英文名:    FGF21 ELISA Kit
成纤维细胞生长因子19(FGF19)ELISA试剂盒    ,英文名:    FGF19 ELISA Kit
成纤维细胞生长因子18(FGF18)ELISA试剂盒    ,英文名:    FGF18 ELISA Kit
成纤维细胞生长因子17(FGF17)ELISA试剂盒    ,英文名:    FGF17 ELISA Kit
成纤维细胞生长因子13(FGF13)ELISA试剂盒    ,英文名:    FGF13 ELISA Kit
成纤维细胞生长因子12(FGF12)ELISA试剂盒    ,英文名:    FGF12 ELISA Kit
成纤维细胞生长因子11(FGF11)ELISA试剂盒    ,英文名:    FGF11 ELISA Kit
成纤维细胞激活蛋白α(FAPα)ELISA试剂盒    ,英文名:    FAPα ELISA Kit
成神经细胞瘤抑制瘤变蛋白1(NBL1)ELISA试剂盒    ,英文名:    NBL1 ELISA Kit
成肌分化蛋白(MyoD)ELISA试剂盒    ,英文名:    MyoD ELISA Kit
成簇蛋白(TUFT)ELISA试剂盒    ,英文名:    TUFT ELISA Kit
沉默调节蛋白7(SIRT7)ELISA试剂盒    ,英文名:    SIRT7 ELISA Kit
沉默调节蛋白6(SIRT6)ELISA试剂盒    ,英文名:    SIRT6 ELISA Kit
沉默调节蛋白5(SIRT5)ELISA试剂盒    ,英文名:    SIRT5 ELISA Kit
沉默调节蛋白4(SIRT4)ELISA试剂盒    ,英文名:    SIRT4 ELISA Kit
沉默调节蛋白3(SIRT3)ELISA试剂盒    ,英文名:    SIRT3 ELISA Kit
沉默调节蛋白2(SIRT2)ELISA试剂盒    ,英文名:    SIRT2 ELISA Kit
沉默调节蛋白1(SIRT1)ELISA试剂盒    ,英文名:    SIRT1 ELISA Kit
巢蛋白2(NID2)ELISA试剂盒    ,英文名:    NID2 ELISA Kit
巢蛋白(NID)ELISA试剂盒    ,英文名:    NID ELISA Kit
超氧化物歧化酶1(SOD1)ELISA试剂盒    ,英文名:    SOD1 ELISA Kit
常染色体隐性遗传性耳聋59蛋白(DFNB59)ELISA试剂盒    ,英文名:    DFNB59 ELISA Kit
肠型脂肪酸结合蛋白(FABP2)ELISA试剂盒    ,英文名:    FABP2 ELISA Kit
肠碱性磷酸酶(ALPI)ELISA试剂盒    ,英文名:    ALPI ELISA Kit
叉头框蛋白P3(FOXP3)ELISA试剂盒    ,英文名:    FOXP3 ELISA Kit
叉头框蛋白P1(FOXP1)ELISA试剂盒    ,英文名:    FOXP1 ELISA Kit
叉头框蛋白O3(FOXO3)ELISA试剂盒    ,英文名:    FOXO3 ELISA Kit
叉头框蛋白O1(FOXO1)ELISA试剂盒    ,英文名:    FOXO1 ELISA Kit
叉头框蛋白C1(FOXC1)ELISA试剂盒    ,英文名:    FOXC1 ELISA Kit
层粘连蛋白γ3(LAMγ3)ELISA试剂盒    ,英文名:    LAMγ3 ELISA Kit
层粘连蛋白γ2(LAMγ2)ELISA试剂盒    ,英文名:    LAMγ2 ELISA Kit即用型评板培养基

 


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