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技术文章

尿道定位显色培养基检测方法

阅读:271发布时间:2018-11-22

1  材料与方法
1.1  标准菌株来源  大肠杆菌ATCC25922、费氏柠檬酸杆菌ATCC8090、鼠伤寒沙门菌CMCC(B)50115、*ATCC6538、肠炎沙门菌CMCC(B)50335、汤卜逊沙门菌CMCC(B)50023、伤寒沙门菌CMCC(B)50071、奇异变形杆菌CMCC(B)49005、嗜水气单胞菌GIM1.172、铜绿假单胞菌ATCC9027,均由广东省微生物研究所提供。
1.2  培养基及试剂  CHROMagar沙门菌显色培养基由法国科玛嘉公司提供;  HK沙门菌显色培养基基础和选择性添加剂由广东环凯微生物科技有限公司提供;DHL干粉培养基由北京陆桥技术有限责任公司提供;GNI+试剂条由法国梅里埃公司提供。
1.3  主要仪器  法国生物梅里埃公司 Biomerieux全自动微生物鉴定系统(VITEK32)。
1.4  样品  从广东省污染物监测网检测结果中挑取微生物污染严重的样品,其中熟食20份,蔬菜、牛奶各10份。
1.5  方法
1.5.1  培养基制备  CHROMagar沙门菌显色培养基、HKM沙门菌显色培养基、DHL干粉培养基均按说明书制备。
1.5.2  显色培养基特异性和灵敏度检验  将大肠杆菌、费氏柠檬酸杆菌、鼠伤寒沙门菌、*、肠炎沙门菌、汤卜逊沙门菌、伤寒沙门菌、奇异变形杆菌、嗜水气单胞菌、铜绿假单胞菌沙门菌参考菌株画线接种在营养琼脂培养基上37℃培养24h后,挑取单菌落加到10ml 0.85%生理盐水中配成原液(n×108cfu/ml),然后进行10倍梯度稀释,取10-5、10-6、10-7菌液各100μl,分别涂布CHROMagar培养基、HK培养基平板,37℃培养24h,观察菌落特征、量取菌落直径和计算沙门菌平板的菌落数。
1.5.3  实际样品检测  从超市和菜市场购买实际样品共40份,按国标GB4789.4-2003称取、稀释样品,各取100μl样品稀释液涂布于CHROMagar平板、HK平板、DHL平板,经37℃×24h培养后观察沙门菌的检出情况。
1.6  分离鉴定  将疑似菌落分离纯化,用法国梅里埃公司GNI+试剂条进行生化鉴定。


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