即用型评板培养基使用操作要点
1 试剂
的试剂是保证检验质量的基础。从4℃冰箱取出的试剂必须放置室温20～30 min 后再启用，否则水化层的形成可能影响试剂的原始浓度及试剂中溶质分子的均匀分布。未用完的试剂和质控品应密封并及时放回冰箱保存。根据蛋白质在冷冻过程中出现蛋白分子分布改变的特点，试剂正式启用前应充分混匀。所用蒸馏水、去离子水和自行配制的缓冲液等，都必须调整其pH 值和离子强度等。不同批次的试剂在制作过程中很难保证质量*一致，因此必须选择和订购长批号的试剂，并保证保存条件，严格执行这一标准可以避免试剂批号改变而重建质控体系及重新评估试剂的复杂过程，并且能够保证结果的稳定性。
2 标本
患者标本中有可能含有干扰试验的免疫物质，导致假阳性或假阴性的结果，干扰因素一般可分为两类，即内源性和外源性干扰因素。内源性干扰因素一般包括类风湿因子、补体、高浓度的非特异性免疫球蛋白、异嗜性抗体及某些自身抗体等，避免内源性干扰因素主要通过选择合适的试剂；外源性干扰因素包括标本溶血、标本被细菌污染、标本贮存时间过长及标本凝固等。要注意避免标本出现严重溶血，标本中血红蛋白中含有血红素基因，其具有类过氧化物的活性，因此，在以辣根过氧化物酶（HRP）为标记的ELISA测定试验中，容易在温育过程中吸附于固相，从而与加入的底物反应显色。标本在低温下保存时间过长，IgG可聚合成多聚体，在间接法ELISA测定中会导致本底加深，甚至出现假阳性结果。通常血清标本可在2～8℃保存1 周，冷冻保存时间会更长。血清标本应充分离心，否则可因纤维蛋白原非特异吸附于微孔而造成假阳性结果。冷冻保存标本避免反复冻融，标本的反复冻融会因其所产生的机械剪切力对标本中的蛋白等分子产生破坏作用，使抗体效价下降从而引起假阴性结果。标本的采集及分离要注意尽量避免细菌的污染。此外，标本在冻存时会因蛋白质局部浓缩分布不均，因此重新溶解的标本必须混匀，但不要剧烈振荡和反复颠倒。
3 操作因素
3.1 加样
加样器是一种比较精密的工具，其在长时间使用时会因机械磨损或推动杆内附着的血痂等原因造成加样不准，因此必须定期对加液器进行维护和校准。每次加不同的标本均需更换吸嘴，以免发生交叉污染；加样速度不可太快，以免将标本加在孔壁上部，并注意不要溅出或产生气泡，加样时还应注意操作时差对结果的影响，尤其对竞争法检测结果影响更大。因此建议在加酶结合物和底物时用多道加液器，或者双人同时加样以减少操作时差对结果的影响，另外有些项目在检测前需要稀释以减少非特异性反应。稀释的方式非常重要，*佳方式是采用振荡器混匀，不可随意改变混匀方式。
3.2.1温育的温度：育常采用的温度有43 、37℃、室温或4℃等。37℃是实验室中常用的温育温度，也是大多数抗原抗体结合的*适反应温度。抗原抗体反应一般在37℃经1～2 h 产物的生成可达，为加速反应，可在一定范围内提高反应的温度并在反应过程中连续振荡来增加抗原抗体接触的概率。抗原抗体反应在4℃更为*，形成的产物更多、更稳定，但因所需时间太长，在ELISA检测中一般不予采用。
3.2.2温育的方式：温育方式常采用温箱法、微波辐射法和水浴法。其中水浴法能较好解决因受热不均衡所致的周围孔与*孔结果的吸光度差异（即“边缘效应”）。可将ELISA板置于水浴箱中，板底应贴着水面，使温度迅速平衡，为避免蒸发，可用塑料贴封纸覆盖板孔。若用温箱，ELISA板应放在湿盒内，湿盒要选用传热性良好的材料（如金属等），在盒底垫湿的纱布，*后将ELISA板放在湿纱布上。温育过程中每块反应板不能重叠放置，防止温度扩散的不均匀性。
3.3 洗涤
洗涤是ELISA不同于均相免疫学检测技术的一大特征，洗涤在整个ELISA反应过程中虽不是一个反应步骤，却非常关键。其目的是去除反应体系中与反应无关的成分，包括未结合的酶结合物以及反应过程中非特异性吸附于固相载体的干扰物质。洗涤液通常为含有一定浓度Tween 20 的缓冲液，Tween 20 是一种非离子去垢剂，既含亲水基团，又含疏水基团，在洗涤中的作用机制是借助其疏水基团与经疏水性相互作用被动吸附于聚苯乙烯固相上蛋白分子的疏水基团形成疏水键，从而削弱蛋白分子与固相的吸附。同时在其亲水基团与液相中水分子的结合作用下，促进蛋白质分子脱离固相而进入液相，*终被洗脱。必须注意非离子去垢剂的使用浓度，*常用的洗涤液是含0.05 %Tween20，pH为中性的磷酸盐缓冲液，如果洗涤液中的Tween20 超过0.2% ，可使包被于固相上的抗原抗体解吸附而影响实验的测定下限。洗涤可采用洗板机或手工洗涤两种方式，手工洗板则分为浸泡式和流水冲洗式洗涤。无论洗板方式如何，在向板内注液时应当避免气泡残留孔内，否则会因洗涤液难以进入孔中而影响洗涤效果。在采用洗板机洗板时，要保证洗板机上的每个吸液针都能一致地插入板孔底部将洗液*吸净，要求洗板后残液小于2 μL，即人工扣板垫纸不湿，浸泡时间超过45 s。
即用型评板培养基小鼠苗条素受体(LR/Ob-R)ELISA试剂盒 ，英文名： LR/Ob-R ELISA Kit
小鼠免疫球蛋白M(IgM)ELISA试剂盒 ，英文名： IgM ELISA Kit
小鼠免疫球蛋白G4(IgG4)ELISA试剂盒 ，英文名： IgG4 ELISA Kit
小鼠免疫球蛋白G2(IgG2)ELISA试剂盒 ，英文名： IgG2 ELISA Kit
小鼠免疫球蛋白G1(IgG1)ELISA试剂盒 ，英文名： IgG1 ELISA Kit
小鼠免疫球蛋白G(IgG)ELISA试剂盒 ，英文名： IgG ELISA Kit
小鼠免疫球蛋白E(IgE)ELISA试剂盒 ，英文名： IgE ELISA Kit
小鼠免疫球蛋白D(IgD)ELISA试剂盒 ，英文名： IgD ELISA Kit
小鼠免疫球蛋白A(IgA)ELISA试剂盒 ，英文名： IgA ELISA Kit
小鼠轮状病毒(RV)抗原(Ag)ELISA试剂盒 ，英文名： Ag ELISA Kit
小鼠卵清蛋白特异性IgG(OVA sIgG)ELISA试剂盒 ，英文名： OVA sIgG ELISA Kit
小鼠卵清蛋白特异性IgE(OVA sIgE)ELISA试剂盒 ，英文名： OVA sIgE ELISA Kit
小鼠卵泡抑素(FS)ELISA试剂盒 ，英文名： FS ELISA Kit
小鼠硫氧化还原蛋白(Trx)ELISA试剂盒 ，英文名： Trx ELISA Kit
小鼠硫氧还蛋白还原酶(TrxR)ELISA试剂盒 ，英文名： TrxR ELISA Kit
小鼠磷脂酰*(PS)ELISA试剂盒 ，英文名： PS ELISA Kit
小鼠磷脂酰肌醇抗体IgG/IgM(PI Ab-IgG/IgM)ELISA试剂盒 ，英文名： PI Ab-IgG/IgM ELISA Kit
小鼠磷脂酰肌醇蛋白聚糖3(GPC-3)ELISA试剂盒 ，英文名： GPC-3 ELISA Kit
小鼠磷脂酶D2(PLD2)ELISA试剂盒 ，英文名： PLD2 ELISA Kit
小鼠磷脂酶A2(PL-A2)ELISA试剂盒 ，英文名： PL-A2 ELISA Kit
小鼠磷脂肌醇3激酶(PI3-K)ELISA试剂盒 ，英文名： PI3-K ELISA Kit
小鼠磷酸腺苷(cAMP)ELISA试剂盒 ，英文名： cAMP ELISA Kit
小鼠磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(PCK)ELISA试剂盒 ，英文名： PCK ELISA Kit
小鼠磷酸肌醇3激酶(PI3K)ELISA试剂盒 ，英文名： PI3K ELISA Kit
小鼠磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶(pAMPK)ELISA试剂盒 ，英文名： pAMPK ELISA Kit
小鼠磷酸化细胞外信号调节激酶(p-ERK)ELISA试剂盒 ，英文名： p-ERK ELISA Kit
小鼠磷酸化细胞外信号调节激酶(pERK)ELISA试剂盒 ，英文名： pERK ELISA Kit
小鼠磷酸化*蛋白激酶JAK3(pJAK3)ELISA试剂盒 ，英文名： pJAK3 ELISA Kit
小鼠磷酸化核因子-κB(p-NF-κB)ELISA试剂盒 ，英文名： p-NF-κB ELISA Kit
小鼠磷酸化蛋白激酶C(P-PKC)ELISA试剂盒 ，英文名： P-PKC ELISA Kit
小鼠磷酸化蛋白激酶B(P-PKB)ELISA试剂盒 ，英文名： P-PKB ELISA Kit即用型评板培养基
