即用型评板培养基实验经验总结
恒远为您分享ELISA实验经验总结 点击次数：116 发布时间：2016/9/6
ELISA检测系统可谓是免疫学反应应用到科研中zui为灵敏的技术手段。可是在新老手操作过程中总是会出现或大或小的问题，今天恒远在这里为大家分享ELISA的经验小总结:
1、包被原的性质很重要，蛋白浓度，是否降解，这关系到你做出的抗体可不可以被其识别，所以保存抗原很重要，我做重组蛋白时，师兄都严格警告我一定要在冰浴下缓慢融化就是这个道理。还有有的包被原可能不是蛋白，对于*和脂类物质或小分子物质我们要事先对其改造再加以包被，我把方法简要的列出如下:①亲和素*:先亲和素先包被载体，加入*化的DNA，这种包被方法均匀、牢固，已扩大应用于各种抗原物质的定量测定。②脂类物质:可将其在有机溶剂(例如乙醇)中溶解后加入ELISA板孔中，开盖置冰箱过夜或冷风吹干，待酒精挥发后，让脂质自然干固在固相表面。③小分子必须依靠和大的蛋白载体偶联后才能固定在固相载体上。
2、包被液的选择，一般选择ph9.6的碳酸盐缓冲液。但有时由于试验的需要，包被原的特殊性也可能采用中性的缓冲溶液来包。应注意以下原理：由于蛋白质与聚苯乙烯固相载体是通过物理吸附结合的，靠的是蛋白质分子结构上的疏水基团与固相载体表面的疏水基团间的作用，这种物理吸附是非特异性的，受蛋白质的分子量、等电点、浓度等的影响，大分子蛋白质较小分子蛋白质通常含有更多的疏水基团，故更易吸附到固相载体表面。具体的试验还要有坚固的理论外也要实践，看一下zui终可不可以应用到自己试验当中去。常用的包被液除了刚才提到的pH9.6碳酸盐缓冲液，还有pH7.2的磷酸盐缓冲液和pH7-8的Tris-HCL缓冲液等等。
3、封闭：继包被之后用高浓度的无关蛋白质溶液再包被的过程。封闭就是让大量不相关的蛋白质充填这些空隙，从而排斥ELISA后的步骤中干扰物质的再吸附。常用封闭剂有：0.05%-0.5%的BSA;10%的小牛血清或1%明胶;脱脂奶粉，比较价廉，可以高浓度使用(5%-10%);还有一些稀有用到的各种动物血清(主要为了排除相似蛋白干扰)和酪蛋白等等。但zui终选用什么，要依据试验具体来实践。
4、洗涤板：可以说在ELISA操作中，洗涤是zui主要的关键技术。因为聚苯乙烯等塑料对蛋白质的吸附是普遍性的，为达到分离游离的和结合的酶标记物的目的，清除残留在板孔中游离的物质，以及非特异性地吸附的干扰物质，在洗涤时又应把这种非特异性吸附的干扰物质洗涤下来。所以在洗板时会有一定误差，人为因素很大(当然有条件的用洗板机除外)，洗的不*或串了孔，对如此灵敏的ELISA系统可是不小的影响。
5、加抗体标本(和二抗):注意该换枪头时换枪头。标本稀释一般可用PBS稀释，也可用封闭液去稀释。如需加二抗，还要注意二抗的工作浓度，太高浪费，太低则着色浅。
6、显色:显色系统又很多，我们一开始做的时候，要选择适宜的显色系统。注意显色系统酶活性底物的保存HRP结合物加硫柳泵，AP结合物可加叠氮钠。
7、每次做尽量要把阴阳空三个对照做好，如出现问题也好分析。
即用型评板培养基犬窖蛋白Caveolin-1(CAV1)ELISA Kit 英文名： Dog Caveolin-1,CAV1 ELISA kit
犬降钙素原(PCT)ELISA Kit 英文名： Canine Procalcitonin,PCT ELISA Kit
犬降钙素(CALCA)ELISA Kit 英文名： Dog calcitonin,CALCA ELISA kit
犬碱性磷酸酶(ALP)ELISA Kit 英文名： Canine alkaline phosphatase,ALP ELISA Kit
犬甲状腺素(T4)ELISA Kit 英文名： Canine thyroxine,T4 ELISA Kit
犬甲状旁腺激素(PTH)ELISA Kit 英文名： Canine Parathyroid hormone,PTH ELISA Kit
犬基质金属蛋白酶9/明胶酶B(MMP-9/Gelatinase B)ELISA Kit 英文名： Dog matrix metalloproteinase 9/Gelatinase B,MMP-9 ELISA Kit
犬基质金属蛋白酶3(MMP-3)ELISA Kit 英文名： Dog Matrix metalloproteinase 3,MMP-3 ELISA kit
犬基质金属蛋白酶2/明胶酶A(MMP-2/Gelatinase A)ELISA Kit 英文名： Canine Matrix metalloproteinase 2/Gelatinase A,MMP-2 ELISA kit
犬基质金属蛋白酶13(MMP-13)ELISA Kit 英文名： Canine Matrix metalloproteinase 13,MMP-13 ELISA kit
犬基质金属蛋白酶1(MMP-1)ELISA Kit 英文名： Canine Matrix metalloproteinase 1,MMP-1 ELISA kit
犬肌酸激酶同工酶MB(CK-MB)ELISA Kit 英文名： Canine Creatine Kinase MB isoenzyme,CK-MB ELISA Kit
犬肌红蛋白(MYO/MB)ELISA Kit 英文名： Dog Myoglobin,MYO/MB ELISA Kit
犬肌酐(Cr)ELISA Kit 英文名： Canine Creatinine,CR ELISA KIT
犬黄体生成素(LH)ELISA Kit 英文名： Canine Luteinizing Hormone,LH ELISA Kit
犬*(cAMP)ELISA Kit 英文名： Canine cyclic adenosine monophosphate,cAMP ELISA Kit
犬环磷酸鸟苷(cGMP)ELISA Kit 英文名： Canine cyclic Guanosine monophosphate,cGMP ELISA Kit
犬环加氧酶2(COX-2)ELISA Kit 英文名： Dog cyclooxygenase-2,COX-2 ELISA kit
犬红细胞生成素(EPO)ELISA Kit 英文名： Dog Erythropoietin,EPO ELISA Kit
犬胱天蛋白酶12(Casp-12)ELISA Kit 英文名： Canine Caspase 12,Casp-12 ELISA Kit
犬骨形成蛋白-1(BMP-1)ELISA Kit 英文名： Canine bone morphogenetic protein 1,BMP-1 ELISA Kit即用型评板培养基
