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ELISA是以免疫学反应为基础,将抗原、牽9体的特异性反应与酶对底物的高效催化作用相结合起来的一种敏感性很高的试验技术。由于抗原、抗体的反应在一种固相载体──聚苯乙烯微量滴定板的孔中进行,每加入一种试剂孵育后,可通过洗涤除去多余的游离反应物,从而保证试验结果的特异性与稳定性。在实际应用中,通过不同的设计,具体的方法步骤可有多种。即:用于检测抗体的间接法(图a)、用于检测抗原的双抗体夹心法(图b)以及用于检测小分子抗原或半抗原的抗原竞争法等等。比较常用的是ELISA双抗体夹心法及ELISA间接法。实验新手讲解自己的ELISA操作流程,您没见过吧,本章就由我司一个客户朋友亲身讲讲他自己的实验经历。让我们一起阅读!给师弟科普ELISA基本步骤。与其写个文档,不如直接写帖子,反正工作量一样。我自己做ELISA也只是初学者,所以说得不对的地方,请大家多多指正。ELISA有白底(上图,不可拆)和黑空板子(可拆,8个一排,12排)。用吸光度(一般是450nm的OD值)来检测,就只能用白底的板子。黑底的板子可以用Lumin读数。步,拿到板子,还有封盖膜。第二步:用100ul包被抗体,包被好板子之后,轻弹混匀。将封盖膜的白色撕去,用透明有粘性的膜,贴在板子上,把膜压紧(贴膜是为了防止液体挥发,所以一定要把每孔黏牢)。室温孵育过夜。注意事项:1.如果一次只做一部分孔,贴膜可以剪刀剪开,只用一部分。保证膜可以把加液后的孔盖住就可以。2.加样时候,一定要保证每孔加样量*一样。避免因为操作原因,每孔液体量有区别。ELISA比较敏感,操作误差会导致zui后读数有不小的差别。3.加的样,保证样品加在孔底,不要粘在管壁上,减少孔与孔之间的差异。第二天早上,来洗掉包被液。
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