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武汉艾美捷科技有限公司
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阅读：3974发布时间：2020-6-28
免疫共沉淀（Co-Immunoprecipitation）是以抗体和抗原之间的专一性作用为基础的用于研究蛋白质相互作用的经典方法。是确定两种蛋白质在完整细胞内生理性相互作用的有效方法。 当细胞在非变性条件下被裂解时，完整细胞内存在的许多蛋白质－蛋白质间的相互作用被保留了下来。当用预先固化在argarose beads上的蛋白质A的抗体免疫沉淀A蛋白，那么与A蛋白在体内结合的蛋白质B也能一起沉淀下来。再通过蛋白变性分离，对B蛋白进行检测，进而证明两者间的相互作用。 这种方法得到的目的蛋白是在细胞内与兴趣蛋白天然结合的，符合体内实际情况，得到的结果可信度高。这种方法常用于测定两种目标蛋白质是否在体内结合；也可用于确定一种特定蛋白质的新的作用搭档。 原理： 当细胞在非变性条件下被裂解时，完整细胞内存在的许多蛋白质－蛋白质间的相互作用被保留了下来。当用预先固化在Argarose Beads上的蛋白质A的抗体免疫沉淀A蛋白，那么与A蛋白在体内结合的蛋白质B也能一起沉淀下来。再通过蛋白变性分离，对B蛋白进行检测，进而证明两者间的相互作用。 这种方法得到的目的蛋白是在细胞内与兴趣蛋白天然结合的，符合体内实际情况，得到的结果可信度高。这种方法常用于测定两种目标蛋白质是否在体内结合；也可用于确定一种特定蛋白质的新的作用搭档。
优点： （1）相互作用的蛋白质都是经翻译后修饰的，处于天然状态； （2）蛋白的相互作用是在自然状态下进行的，可以避免人为的影响； （3）可以分离得到天然状态的相互作用蛋白复合物。 缺点： （1）可能检测不到低亲和力和瞬间的蛋白质－蛋白质相互作用； （2）两种蛋白质的结合可能不是直接结合，而可能有第三者在中间起桥梁作用； （3）必须在实验前预测目的蛋白是什么，以选择后检测的抗体，所以，若预测不正确，实验就得不到结果，方法本身具有冒险性。 （4）灵敏度没有亲和色谱高。 常见问题：在免疫沉淀实验后的WB验证环节中，当使用常规的 Anti-IgG (H+L) 酶标二抗时，通常会出现对应免疫沉淀一抗的重链（50 kDa）和轻链（25 kDa）的两条带。如果检测的目的蛋白分子量在50 kDa或者25 kDa附近时，就会受到这两条带的干扰。 Abbkine解决方案：产生此问题的重点在于实验中目的蛋白的信号模糊，无法进行判断，那就需要在根本上将干扰的信号降到低，而IPKine系列二抗经过特别设计和优化，可以和重/轻链特异性结合从而明显看到目的蛋白信号。如果目的条带在55kDa左右，可以通过选择与轻链特异性结合的二抗，来消除重链条带对目的蛋白检测的干扰。如下图：
IPKine山羊抗小鼠IgG轻链二抗 消除重链干扰，货号：A25012 IPKine小鼠抗兔IgG轻链二抗 消除重链干扰，货号：A25022 IPKine山羊抗小鼠IgG重链二抗 消除轻链干扰，货号：A25112 IPKine山羊抗兔IgG重链二抗 消除轻链干扰，货号：A25222 IPKine是一系列新型的二抗产品，能有效解决IP-WB后的轻/重链干扰问题。IPKine系列二抗经过特别优化，不会与IgG的轻/重链分子结合，只识别IgG分子的重/轻链部分，从而能有效解决IP实验后的WB检测中面临的轻/重链干扰信号降到低。 另外，IPKine系列二抗经过特别优化，其针对目的种属的特异性非常高，同时针对其他非目的种属的抗体分子的非特异性结合降到低，从而有效避免了二抗与样本内免疫球蛋白分子的非特异性杂交，提高实验的特异性和信噪比。 特点与优势： 1，小包装即用型试剂，性价比高； 2，更干净的背景，更清晰的条带，卓丨越的信噪比； 3，完美避免抗体重链或者轻链的干扰问题； 4，使用简便，无需额外的试剂和操作步骤； 5，经特殊优化，与其它种属的IgG分子的交叉反应极低。 |
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