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真菌种属鉴定 PCR Mix 1100 次实验步骤

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更新时间:2017-01-19 16:31:25浏览次数:373次

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产品简介

真菌种属鉴定 PCR Mix 1100 次实验步骤运输及保存 低温运输,-20℃保存,有效期一年。

详细介绍

真菌种属鉴定 PCR Mix 1100 次实验步骤产品及特点:
本试剂盒提供合成 cDNA *链所需要的全部试剂。其原理是用突变的莫洛尼氏 鼠白血病病毒反转录酶(M-MuLV RT)高效合成 mRNA 的全长 cDNA 拷贝。
1. 使用突变的反转录酶,内源 RNase H 活性低。
2. zui长可合成 13 Kb 的 cDNA。
3. 可以使用 oligo-dT、随机引物和 RNA 专一性引物三种引物(前两种本试剂盒提 供)。
4. 总 RNA、poly(A)+RNA 或特殊 RNA 均可作为模板。
5. 可用于 cDNA 文库构建、RT-PCR、探针标记等。
真菌种属鉴定 PCR Mix 1100 次实验步骤合成建文库用的 1st-strand cDNA:

1. 按下表配制 RT 反应体系: RNA 模板 poly(A) mRNA 1 ug 或专一的 RNA 0.5-1 ug
注意:RNA 样品不能含有基因组 DNA 污染。 引物 Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL 或随机引物(0.2 ug/uL) 1 uL 或 RNA 模板专一性引物 100 pmol 注意:随机引物于 RNA 模板的比例跟 cDNA 合成的平均长度成反比。 RNase-free 水 补水到 13 uL 2. 70℃保温 5 分钟后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer(含 dNTP)。
4. 37℃保温 5 分钟。对富含二级结构的高 GC RNA 模板,可以改成 45℃保 温 5 分钟。如果使用随机引物,则改成 25℃ 5 分钟)。
5. 加入 2 uL MMLV 逆转录酶(含 RI),反应终体积为 20uL。
6. 42℃保温 60 分钟(但如果使用随机引物,需要先 25℃保温 10 分钟,然 后再转移到 42℃保温 60 分钟)。此步为 RT 反应。
7. 70℃保温 10 分钟以终止反应,放置在冰上待用。合成的 cDNA 可以用于 第二链 cDNA 的合成或放置在-20℃*保存。
按下表配制 RT 反应体系:
对照 RNA 模板(0.5 ug/uL) 2 uL
引物
Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL
或随机引物(0.2 ug/uL) 1 uL
或对照引物 2 uL
RNase-free 水 补水到 13 uL
2. 70℃保温 5 分钟后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer(含标记 dNTP,本试剂不提供)。
4. 37℃保温 5 分钟。如果使用随机引物,则保温温度只能是 25℃。
5. 加入 2 uL MMLV 逆转录酶(含 RI),反应终体积为 20uL。
6. 42℃保温 60 分钟(但如果使用随机引物,需要先 25℃保温 10 分钟,然后再转移到 42℃保温 60 分钟)。
7. 加 1uL 0.5M EDTA,放置在冰上待用。
8. 电泳检测。合成的 cDNA 的量一般有加入 RNA 总量的 50%以上,电泳一般能出现 1.1Kb 的片段(如果使用随机引物,将出现多个小片段)。

〖干燥失重〗:≤0.50%
〖熔点〗:168~171℃
〖〖性状〗(以下信息仅供参考)〗:白色或米黄色结晶粉末,对湿和光敏感,有刺激性。一种检测过氧化轻或过氧化物酶活性的色原试剂,当加入过氧化轻或过氧化物酶时其无色水溶液变成蓝绿色(zui大吸收波长在655nm)。溶解于氯方和热的甲醇,不溶于水
〖用途〗:本品仅供科研,不得用于其它〖用途〗。(以下〖用途〗仅供参考)过氧化物酶的染色剂。是一种新型安全的色原试剂。与传统的色原试剂联苯胺、邻联甲苯胺及邻苯二胺等相比较,TMB具有检测灵敏度高、稳定性好等优点,而且使用安全。经动物试验和Ames细菌自动变异性试验结果表明,TMB为非致癌物和非致突变物。
〖保存〗:2~8℃,避光,远离金属
3,3,5,5-四甲基联苯胺盐酸盐
〖英文名称〗:TMB?2HC1;3,3,5,5-Tetramethyl benzidine dihydrochloride;4,4'-Diamino-3,3',5,5'-tetramethylbiphenyl dihydrochloride 
〖其他名称〗:TMB盐酸盐;3,3,5,5-四甲基联苯胺盐酸盐;二盐酸3,3',5,5'-四甲基联苯胺
〖CAS号〗:64285-73-0
C16H20N2?2HC1=313.27
〖级别〗:BR 
〖含量〗:≥98.0%
〖熔点〗:≥300℃
Conjugation grade

φX174RF Ⅱ DNA    一管式植物 DNAout
DAPI 干粉    一氧化氮合成酶测试盒
碘化丙啶干粉    一氧化氮检测试剂盒 ( 化学法 )
Hoechst33258 干粉    一氧化氮检测试剂盒 ( 硝酸还原酶法 )
Hoechst33342 干粉    一站式 Blue Native PAGE 电泳套装
WST-1 细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒    一站式 CTAB-PAGE 电泳套装
Furin 蛋白酶    一站式 DNA 非变性 PAGE 电泳套装
二硫键异构酶,人    一站式 DNA 尿素 -PAGE 电泳套装
超氧化物歧化酶,人    一站式 GST 标记蛋白质微量纯化套装
硫氧还蛋白    一站式 GST 标记蛋白质微量纯化套装
一站式 MBP 标签蛋白纯化套装    一站式 His 标记蛋白质微量纯化套装
SUMO 蛋白酶    一站式 His 标记蛋白质微量纯化套装
TEV 蛋白酶    一站式 MBP 标签蛋白纯化套装
白提取试剂盒


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