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上海邦景实业有限公司
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T7 体外转录试剂盒50 次实验步骤运输及保存 低温运输,-20℃保存,有效期一年。
T7 体外转录试剂盒50 次实验步骤产品介绍:
T7 体外转录试剂盒50 次实验步骤产品及特点:
本试剂盒提供合成 cDNA *链所需要的全部试剂。其原理是用突变的莫洛尼氏 鼠白血病病毒反转录酶(M-MuLV RT)高效合成 mRNA 的全长 cDNA 拷贝。
1. 使用突变的反转录酶,内源 RNase H 活性低。
2. zui长可合成 13 Kb 的 cDNA。
3. 可以使用 oligo-dT、随机引物和 RNA 专一性引物三种引物(前两种本试剂盒提 供)。
4. 总 RNA、poly(A)+RNA 或特殊 RNA 均可作为模板。
5. 可用于 cDNA 文库构建、RT-PCR、探针标记等。
合成建文库用的 1st-strand cDNA:
1. 按下表配制 RT 反应体系: RNA 模板 poly(A) mRNA 1 ug 或专一的 RNA 0.5-1 ug
注意:RNA 样品不能含有基因组 DNA 污染。 引物 Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL 或随机引物(0.2 ug/uL) 1 uL 或 RNA 模板专一性引物 100 pmol 注意:随机引物于 RNA 模板的比例跟 cDNA 合成的平均长度成反比。 RNase-free 水 补水到 13 uL 2. 70℃保温 5 分钟后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer(含 dNTP)。
4. 37℃保温 5 分钟。对富含二级结构的高 GC RNA 模板,可以改成 45℃保 温 5 分钟。如果使用随机引物,则改成 25℃ 5 分钟)。
5. 加入 2 uL MMLV 逆转录酶(含 RI),反应终体积为 20uL。
6. 42℃保温 60 分钟(但如果使用随机引物,需要先 25℃保温 10 分钟,然 后再转移到 42℃保温 60 分钟)。此步为 RT 反应。
7. 70℃保温 10 分钟以终止反应,放置在冰上待用。合成的 cDNA 可以用于 第二链 cDNA 的合成或放置在-20℃*保存。
按下表配制 RT 反应体系:
对照 RNA 模板(0.5 ug/uL) 2 uL
引物
Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL
或随机引物(0.2 ug/uL) 1 uL
或对照引物 2 uL
RNase-free 水 补水到 13 uL
2. 70℃保温 5 分钟后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer(含标记 dNTP,本试剂不提供)。
4. 37℃保温 5 分钟。如果使用随机引物,则保温温度只能是 25℃。
5. 加入 2 uL MMLV 逆转录酶(含 RI),反应终体积为 20uL。
6. 42℃保温 60 分钟(但如果使用随机引物,需要先 25℃保温 10 分钟,然后再转移到 42℃保温 60 分钟)。
7. 加 1uL 0.5M EDTA,放置在冰上待用。
8. 电泳检测。合成的 cDNA 的量一般有加入 RNA 总量的 50%以上,电泳一般能出现 1.1Kb 的片段(如果使用随机引物,将出现多个小片段)。
〖保存〗:-20℃。保质期5年
2,2′-联氨-双(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)二胺盐
〖英文名称〗:AzBTS-(NH4)2;Diammonium 2,2′-azino-bis(3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonate);2,2′-Azino-bis(3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid) diammonium salt;ABTS diammonium salt
〖其他名称〗:2,2’-连氮基-双-(3-乙基苯并二氢噻唑啉-6-磺酸)二〖铵盐〗;2,2'-二氮-双(3-乙基苯并噻唑-6-磺酸)〖铵盐〗
〖CAS号〗:30931-67-0
C18H24N6O6S4=548.68
〖级别〗:试剂级
〖含量〗Dye content:≥98.0%
TLC:one spot
〖〖性状〗(以下信息仅供参考)〗:淡黄绿色至绿色粉末。溶于水
〖用途〗:本品仅供科研,不得用于其它〖用途〗。(以下〖用途〗仅供参考)游离氯的光谱试剂,酶免显色底物,过氧化物酶的底物,用于ELISA 步骤,该底物产生一种可溶性的显绿色的终端产品可在405 nm处光谱读取。这种反应可用1%SDS终止
〖保存〗:RT,保质期4年
ABTS液体底物
〖英文名称〗:ABTS substrate liquid
〖其他名称〗:2,2′-联氨-双(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)二胺盐底物;2,2’-连氮基-双-(3-乙基苯并二氢噻唑啉-6-磺酸)二〖铵盐〗底物;2,2'-二氮-双(3-乙基苯并噻唑-6-磺酸)〖铵盐〗底物
尿道上皮细胞生长因子 剪切式匀浆机
平滑肌细胞生长因子 带柄尼龙筛
平滑肌细胞生长因子 ( 不含血清 ) 陶瓷研钵 ( 直径 60 mm)
前列腺上皮细胞生长因子 陶瓷研钵 ( 直径 75 mm)
前脂肪细胞生长因子 1μL 超微量分光光度计
上皮细胞生长因子 0.5mL DNA 离心超滤管 (9-15 KD)
上皮细胞生长因子 0.5mL DNA 离心超滤管 (30-50 KD)
上皮细胞生长因子 -2 0.5mL DNA 离心超滤管 (90-150 KD)
少突胶质前体细胞生长因子 0.5mL DNA 离心超滤管 (150-250 KD)
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