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即用型 PCR 试剂盒 2.0 1 mL实验方法

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更新时间:2017-01-19 14:23:03浏览次数:145次

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产品简介

即用型 PCR 试剂盒 2.0 1 mL实验方法运输及保存 低温运输,-20℃保存,有效期一年。

详细介绍

即用型 PCR 试剂盒 2.0 1 mL实验方法产品及特点:
本试剂盒提供合成 cDNA *链所需要的全部试剂。其原理是用突变的莫洛尼氏 鼠白血病病毒反转录酶(M-MuLV RT)高效合成 mRNA 的全长 cDNA 拷贝。
1. 使用突变的反转录酶,内源 RNase H 活性低。
2. zui长可合成 13 Kb 的 cDNA。
3. 可以使用 oligo-dT、随机引物和 RNA 专一性引物三种引物(前两种本试剂盒提 供)。
4. 总 RNA、poly(A)+RNA 或特殊 RNA 均可作为模板。
5. 可用于 cDNA 文库构建、RT-PCR、探针标记等。
即用型 PCR 试剂盒 2.0 1 mL实验方法产品介绍:
合成建文库用的 1st-strand cDNA:

1. 按下表配制 RT 反应体系: RNA 模板 poly(A) mRNA 1 ug 或专一的 RNA 0.5-1 ug
注意:RNA 样品不能含有基因组 DNA 污染。 引物 Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL 或随机引物(0.2 ug/uL) 1 uL 或 RNA 模板专一性引物 100 pmol 注意:随机引物于 RNA 模板的比例跟 cDNA 合成的平均长度成反比。 RNase-free 水 补水到 13 uL 2. 70℃保温 5 分钟后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer(含 dNTP)。
4. 37℃保温 5 分钟。对富含二级结构的高 GC RNA 模板,可以改成 45℃保 温 5 分钟。如果使用随机引物,则改成 25℃ 5 分钟)。
5. 加入 2 uL MMLV 逆转录酶(含 RI),反应终体积为 20uL。
6. 42℃保温 60 分钟(但如果使用随机引物,需要先 25℃保温 10 分钟,然 后再转移到 42℃保温 60 分钟)。此步为 RT 反应。
7. 70℃保温 10 分钟以终止反应,放置在冰上待用。合成的 cDNA 可以用于 第二链 cDNA 的合成或放置在-20℃*保存。
按下表配制 RT 反应体系:
对照 RNA 模板(0.5 ug/uL) 2 uL
引物
Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL
或随机引物(0.2 ug/uL) 1 uL
或对照引物 2 uL
RNase-free 水 补水到 13 uL
2. 70℃保温 5 分钟后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer(含标记 dNTP,本试剂不提供)。
4. 37℃保温 5 分钟。如果使用随机引物,则保温温度只能是 25℃。
5. 加入 2 uL MMLV 逆转录酶(含 RI),反应终体积为 20uL。
6. 42℃保温 60 分钟(但如果使用随机引物,需要先 25℃保温 10 分钟,然后再转移到 42℃保温 60 分钟)。
7. 加 1uL 0.5M EDTA,放置在冰上待用。
8. 电泳检测。合成的 cDNA 的量一般有加入 RNA 总量的 50%以上,电泳一般能出现 1.1Kb 的片段(如果使用随机引物,将出现多个小片段)。

碱性蓝26
〖英文名称〗:Basic Blue 26;[4-[[4-Anili-naphthyl][4-(dimethylamino)phenyl]methylene]cyclohexa-2,5-dien-1-ylidene]dimethylammonium chloride;Victoria Blue B;C.I. 44045
〖其他名称〗:维多利亚蓝B;碱性品蓝B;碱性艳蓝B;盐基品蓝B;维多利亚兰B;品蓝B;胜利蓝B
〖CAS号〗:2580-56-5
C33H32ClN3=506.09
〖级别〗:BS
生物染色试验:合格
〖〖性状〗(以下信息仅供参考)〗:青铜色发光颗粒或紫光粉末。溶于热水呈蓝色,溶于乙醇为纯蓝色,微溶于冷水。〖熔点〗 206℃(分解)。zui大吸收波长 599nm
〖用途〗:本品仅供科研,不得用于其它〖用途〗。(以下〖用途〗仅供参考)生物染色剂,如神经组织、胶质、血液、螺旋体染色
〖保存〗:RT,避光。保质期5年
2,4-二羟基-4’-硝基偶氮苯
〖英文名称〗:Azoviolet;Magneson I;4-(4-Nitrophenylazo)resorcinol
〖其他名称〗:对硝基苯偶氮*;镁试剂I;偶氮紫;偶氧紫;(对硝基苯偶氮)*;4-(4-硝基苯偶氮)*
〖CAS号〗:74-39-5
C12H9N3O4=259.22

肌球蛋白    天净沙 SPIA 扩增试剂盒 ( 用于扩增 DNA 模板 )
吖啶橙    亲和素
石榴红硫酸盐    辣根过氧化物酶标记亲和素
N,N- 双 (2- 羟乙基 )-3- 氨基乙磺酸    碱性磷酸酶标记亲和素
乙酰辅酶 A    荧光素 (FITC) 标记亲和素
8- 环戊基 -1,3- 二丙基黄嘌呤    R- 藻红蛋白标记亲和素
5- 溴 -4- 氯 -3- 吲哚基磷酸盐 (BCIP)    中性亲和素蛋白
D- 阿拉伯糖    *
亮抑酶肽    荧光素标记的*
2-( 环己胺基 ) 乙烷磺酸    *化的牛血清白蛋白
氨基 10B    *化的辣根过氧化物酶
乙二醛    *化的碱性磷酸酶 (AP)
    OPD 干粉


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