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上海邦景实业有限公司
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TMB 法*杂交试剂盒5次说明书运输及保存：低温运输，-20℃保存，有效期一年。
TMB 法*杂交试剂盒5次说明书使用方法:
一、交换反应 1. 实验前需自备的试剂：7 M 醋酸铵、*乙醇、70%乙醇等
2. 在微量离心管中制备下列反应液： 成分 加入的体积 自备的 5’磷酸化 DNA 片段 14 μL(≤5 pmoles 的 5′末端) 5×交换反应缓冲液 5 μL [γ -32P] ATP 5 μL T4 多聚核苷酸激酶（10 U/μL） 1 μL 灭菌的超纯水 补足到 25 μL 注：5 pmoles 的 5’末端约等于 0.17 μg 的长 100 bp 的双链 DNA。
3. 37℃反应 30 分钟。
4. 70℃加热 5～10 分钟使酶失活。
5. 加入 10 μL 的 7 M CH3COONH4（pH 4.5）。如使用 CH3COONa 做 乙醇沉淀时使其终浓度达 300 mM。
6. 加入 87.5 μL（2.5 倍）的冷无水乙醇，-20℃放置 30～60 分钟。
7. 离心回收沉淀，用 70%的冷乙醇清洗沉淀，真空干燥。 8. 用适当 Buffer 溶解沉淀。 注：通过第 5～8 步操作几乎可以除去大部分未反应的[γ-32P] ATP，如要 *将其除去时，乙醇沉淀后用凝胶过滤等方法精制即可。如需用*抽 提除去蛋白质时，请在第
8 步之后进行。
TMB 法*杂交试剂盒5次说明书磷酸化反应标记：
A. 去磷酸化反应
1. 实验前需自备的试剂：TE 饱和酚/、3 M NaCl 、*乙醇、70% 乙醇、牛小肠碱性磷酸酶（CIAP）等 2. 在微量离心管中制备下列反应液： 成分 加入的体积 自备的 DNA 片段 133 μL(≤10 μg) 1 M Tris-HCl，pH 8.0 15 μL 牛小肠碱性磷酸酶 （CIAP，10~20 U/μL）
2 μL 灭菌的超纯水 补足到 150 μL
3. 50℃反应 30 分钟。
4. 加入 150 μL 的 TE 饱和酚//（25：24：1），充分混匀。
5. 离心，取上层（水层）移到另一个微量离心管中。
6. 重复操作 4～5。
7. 加入 7.5 μL 的 3 M NaCl（zui终浓度 150 mM）。
8. 加入 375 μL（2.5 倍量）的冷无水乙醇，-20℃放置 30～60 分钟。
9. 离心回收沉淀，用 1 mL 70%的冷乙醇清洗后，沉淀真空干燥。
10. 使用 20 μL 的 TE Buffer 溶解沉淀。
磷酸化反应（前反应）：
1. 在微量离心管中制备下列反应液：
2. 37℃反应 30 分钟。
3. 下面的操作与交换反应的第 4-8 步操作相同。
合成 DNA 寡核苷酸的标记：
当掺入水平很低的时候，需要使用本步骤，即通过体积排阻色谱或过滤试 剂盒除去未反应的标记。Sephadex G-50 层析柱（需另购）对于去除未掺入 的 dNTPs 效果很好，它还能大幅减少小于 20 个碱基的 DNA 寡核苷酸和小于 20 bp 的双链 DNA 的量。使用之前需要在 70℃加热 5～10 分钟以使 T4 多 聚核苷酸激酶失活。Sephadex G-25 层析柱可以用来纯化长度不小于 10 个 碱基的寡核苷酸。
真菌种属鉴定 PCR Mix 2 100 次 *
真菌种属鉴定 PCR Mix 3 100 次 *
真菌种属鉴定 PCR Mix 4 100 次 D- * ( 维生素 H)
真菌种属鉴定 PCR Mix 5 100 次 D(+) 木糖
真菌种属鉴定 PCR Mix 6 100 次 尿苷
真菌种属鉴定 PCR Mix 7 100 次 碱性品红
古细菌种属鉴定 PCR Mix 1 100 次 维生素 E
真细菌种属鉴定 PCR Mix 2 100 次 甜菜碱盐酸盐
古细菌 + 真细菌种属鉴定 PCR Mix 3 100 次 氨甲喋呤
草杆菌 PCR Mix 4 100 次 5- 溴 -2'- 脱氧尿苷
2-Aminofluorene2-芴胺25克CP
*噻肟，英文名或英文缩写：Ceftriaxone sodium，级别：BR，27.5u/mg，规格：100毫克
2,4-D2,4-滴25克高纯，99%
光辉霉素，英文名或英文缩写：Plicamycin，级别：BR，规格：100毫克
1-Naphthylphsophoricacidsodiumsaltα-奈嶙酸钠1克AR，98%
长春新碱硫化物，英文名或英文缩写：VCR，级别：USP级，88%，920u/mg，规格：17.5KU
1,8-Dihydroxyanthraquinone1,8-二羟基-9,10-二酮100克AR，99.5%
2-[1-甲基-6-(beta-羟基苯乙基)-2-哌啶基]苯乙酮盐酸盐，英文名或英文缩写：(-)-Lobeline hydrochloride，级别：BR，850mcg/mg，85%，规格：100毫克
1,1′-Dianthrimide二亚胺1克BR，72%
*4，英文名或英文缩写：VB4，级别：USP级，83%，800u/mg，规格：5KU
TaqDNAPolymeraseTaq DNA聚合酶5毫克BR，400u/mg，粉末
吲哚丙酸钾，英文名或英文缩写：IPA-K，级别：BR，1%，规格：1克
PHENOL,SATURATED(pH6.6/7.9)饱和酚 (pH 6.6/7.9)生物技术级400MLN/A
胞嘧啶核苷，英文名或英文缩写：Cytidine，级别：BR，98%，规格：7.5KU
，英文名
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