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干细胞骤进行操作

阅读:128发布时间:2017-08-21

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干细胞骤进行操作:
可以使用适当的裂解液裂解贴壁细胞、悬浮细胞或组织样品。对于某些特定的亚细胞组份蛋白,例如细胞核蛋白、细胞浆蛋白、线粒体蛋白等,可以参考相关文献提取这些亚细胞组份蛋白,也可以使用试剂盒进行抽提。
收集完蛋白样品后,为确保每个蛋白样品的上样量一致,需要测定每个蛋白样品的蛋白浓度。根据所使用的裂解液的不同,需要采用适当的蛋白浓度测定方法。因为不同的蛋白浓度测定方法对于一些去垢剂和还原剂等的兼容性差别很大。
(1)、SDS-PAGE凝胶配制
SDS-PAGE凝胶可以参考一些文献资料进行配制,也可以使用博研生物的SDS-PAGE凝胶配制试剂盒。该试剂盒提供了除水和配胶器具外的所有试剂以及配制各种浓度SDS-PAGE的配方。
(2)、样品处理
在收集的蛋白样品中加入适量浓缩的SDS-PAGE蛋白上样缓冲液。例如2X或5X的SDS-PAGE蛋白上样缓冲液。使用5X的SDS-PAGE蛋白上样缓冲液可以减小上样体积,在相同体积的上样孔内可以上样更多的蛋白样品。5X的SDS-PAGE蛋白上样缓冲液可以参考相关文献资料配制,也可以使用我公司的SDS-PAGE蛋白上样缓冲液(5X) 。100℃或沸水浴加热3-5分钟,以充分变性蛋白。
(3)、上样与电泳
冷却到室温后,把蛋白样品直接上样到SDS-PAGE胶加样孔内即可。为了便于观察电泳效果和转膜效果,以及判断蛋白分子量大小,使用预染蛋白质分子量标准。
电泳时通常*在上层胶时使用低电压恒压电泳,而在溴酚蓝进入下层胶时使用高电压恒压电泳。对于Bio-Rad的标准电泳装置或类似电泳装置,低电压可以设置在80-100V,高电压可以设置在120V左右。SDS-PAGE可以采用普通的电泳仪就可以满足要求。为了电泳方便起见,也可以采用整个SDS-PAGE过程恒压的方式,通常把电压设置在100V,然后设定定时时间为90-120分钟。设置定时可以避免经常发生的电泳过头。
通常电泳时溴酚蓝到达胶的底端处附近即可停止电泳,或者可以根据预染蛋白质分子量标准的电泳情况,预计目的蛋白已经被适当分离后即可停止电泳。
干细胞HPAF cDNA    人肺动脉成纤维细胞cDNA    20 reactions
HPAEpiC cDNA    人肺泡上皮细胞cDNA    20 reactions
HBEpiC cDNA    人支气管上皮细胞cDNA    20 reactions
HTEpiC cDNA    人气管上皮细胞cDNA    20 reactions
HSAEpiC cDNA    人小气道上皮细胞cDNA    20 reactions
HPF cDNA    人肺成纤维细胞cDNA    20 reactions
HBSMC cDNA    人支气管平滑肌细胞cDNA    20 reactions
HTSMC cDNA    人气管平滑肌细胞cDNA    20 reactions
HSkMC cDNA    人骨骼肌细胞cDNA    20 reactions
HSkMSC cDNA    人骨骼肌卫星细胞cDNA    20 reactions
HSkMM cDNA    人骨骼肌成肌细胞cDNA    20 reactions
HRGEC cDNA    人肾小球内皮细胞cDNA    20 reactions
HRPTEpiC cDNA    人肾近曲小管上皮细胞cDNA    20 reactions
HRCEpiC cDNA    人肾皮质上皮细胞cDNA    20 reactions
HREpiC cDNA    人肾上皮细胞cDNA    20 reactions
HRMC cDNA    人肾系膜细胞cDNA    20 reactions
HBdSMC cDNA    人膀胱平滑肌细胞cDNA    20 reactions
HUC cDNA    人尿道上皮细胞cDNA    20 reactions
HBdSF cDNA    人膀胱基质成纤维细胞cDNA    20 reactions
HPEpiC cDNA    人前列腺上皮细胞cDNA    20 reactions
HPrF cDNA    人前列腺成纤维细胞cDNA    20 reactions
HPSMC cDNA    人前列腺平滑肌细胞cDNA    20 reactions
HCO cDNA    人颅骨造骨细胞cDNA    20 reactions干细胞

 


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