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原代细胞原理

阅读:61发布时间:2017-07-24

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原代细胞原理:
酶谱法的基本过程是先将样品进行SDS-聚丙烯酰胺(SDS-PAGE,含0.1%明胶)电泳分离,然后在有二价金属离子存在的缓冲 系统中使样品中的MMP-9恢复活性,在各自的迁移位置水解凝胶里的明胶,zui后用考马斯亮蓝将凝胶染色,再脱色,在 蓝色背景下可出现白色条带,条带的强弱与MMP-9活性成正比。
操作步骤:
1.标准品的稀释:MMP-9检测试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。
2.加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl,待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品zui终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。
3.温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4.配液:将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用
5.洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。
6.加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。
7.温育:操作同3。
8.洗涤:操作同5。
9.显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟.
10.终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
11.测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。
原代细胞HPAF    人肺动脉成纤维细胞    5 x 10^5 cells/vial
HPAEpiC    人肺泡上皮细胞    1 x 10^6 cells/vial
HBEpiC    人支气管上皮细胞    5 x 10^5 cells/vial
HTEpiC    人气管上皮细胞    5 x 10^5 cells/vial
HSAEpiC    人小气道上皮细胞    5 x 10^5 cells/vial
HPF    人肺成纤维细胞    5 x 10^5 cells/vial
HPF    人肺成纤维细胞    1 x 10^6 cells/vial
HBSMC    人支气管平滑肌细胞    5 x 10^5 cells/vial
HTSMC    人气管平滑肌细胞    5 x 10^5 cells/vial
HBF    人支气管成纤维细胞    5 x 10^5 cells/vial
HSkMC    人骨骼肌细胞    5 x 10^5 cells/vial
HSkMSC    人骨骼肌卫星细胞    5 x 10^5 cells/vial
HSkMM    人骨骼肌成肌细胞    5 x 10^5 cells/vial
HACC    人肾上腺皮质细胞    5 x 10^5 cells/vial
HRGEC    人肾小球内皮细胞    5 x 10^5 cells/vial
HRPTEpiC    人肾小管上皮细胞    5 x 10^5 cells/vial
HRCEpiC    人肾皮质上皮细胞    5 x 10^5 cells/vial
HREpiC    人肾脏上皮细胞    5 x 10^5 cells/vial
HRMC    人肾系膜细胞    5 x 10^5 cells/vial
HBIMEC    人膀胱微血管内皮细胞    5 x 10^5 cells/vial
HBdSMC    人膀胱平滑肌细胞    5 x 10^5 cells/vial
HUC    人尿道上皮细胞    5 x 10^5 cells/vial
HBdSF    人膀胱基质成纤维细胞    5 x 10^5 cells/vial
HPrMEC    人前列腺微血管内皮细胞    5 x 10^5 cells/vial
HPEpiC    人前列腺上皮细胞    5 x 10^5 cells/vial
HPSMC    人前列腺平滑肌细胞    5 x 10^5 cells/vial
HPrF    人前列腺成纤维细胞    5 x 10^5 cells/vial
HCO    人颅骨成骨细胞    5 x 10^5 cells/vial
HO-f    人股骨成骨细胞    5 x 10^5 cells/vial
HC-a    人软骨细胞    5 x 10^5 cells/vial
HS    人滑膜细胞    5 x 10^5 cells/vial
HNPC    人髓核细胞    5 x 10^5 cells/vial
HAFC    人纤维环细胞    5 x 10^5 cells/vial
HHSEC    人肝窦内皮细胞    5 x 10^5 cells/vial
HIBEpiC    人肝内胆管上皮细胞    5 x 10^5 cells/vial
HH    人肝细胞    1 x 10^6 cells/vial
HHSteC    人肝星形细胞    5 x 10^5 cells/vial
HSEC    人脾脏内皮细胞    5 x 10^5 cells/vial
HSF    人脾脏成纤维细胞    5 x 10^5 cells/vial
HCMEC    人心脏微血管内皮细胞    5 x 10^5 cells/vial
HCAEC    人冠状动脉内皮细胞    5 x 10^5 cells/vial
HAEC    人主动脉内皮细胞    5 x 10^5 cells/vial
HASMC    人主动脉平滑肌细胞    5 x 10^5 cells/vial
HAF    人主动脉成纤维细胞    5 x 10^5 cells/vial原代细胞

 


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