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原化细胞操作步骤

阅读:152发布时间:2017-06-26

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原化细胞检测原理
本试剂盒采用双抗体两步夹心酶联免疫吸附法(ELISA)。将标准品、待测样本加入到预先包被神经肽S(NPS)透明酶标包被板中,温育足够时间后,洗涤除去未结合的成分,再加入酶标工作液,温育足够时间后,洗涤除去未结合的成分。依次加入底物A、B,底物(TMB)在辣根过氧化物酶(HRP)催化下转化为蓝色产物,在酸的作用下变成黄色,颜色的深浅与样品中神经肽S(NPS)浓度呈正相关,450nm波长下测定OD值,根据标准品和样品的OD值,计算样本中神经肽S(NPS)含量。
操作步骤
1、准备:从冰箱取出试剂盒,室温复温平衡30分钟。
2、配液:用蒸馏水将20倍浓缩洗涤液稀释成原倍的洗涤液。
3、加标准品和待测样本:取足够数量的酶标包被板,固定于框架上,分别设置标准品孔、待测样本孔和空白对照孔,记录各孔位置,在标准品孔中加入标准品50μL;待测样本孔中先加入待测样本10μL,再加*40μL(即样本稀释5倍);空白对照孔不加。
4、温育:37℃水浴锅或恒温箱温育30min。
5、洗板:弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液,静置1min,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗板4次(也可用洗板机按说明书操作洗板)。
6、加酶标工作液:每孔加入酶标工作液50μL,空白对照孔不加。
7、温育:重复4的操作。
8、洗板:重复5的操作。
9、显色:每孔先加入显色剂A 液50μL,再加入显色剂B液 50μL,37℃避光显色15min。
10、终止:取出酶标板,每孔加终止液50μL,终止反应(颜色由蓝色立转黄色)。
11、测定:以空白孔调零,在终止后15分钟内,用450nm波长测量各孔的吸光值(OD值)。
原化细胞5 ml    间充质干细胞脂肪细胞分化生长添加物    MADS
5 ml    间充质干细胞生长添加物    MSCGS
5 ml    间充质干细胞生长添加物-无血清    MSCGS-2
5 ml    间充质干细胞生长添加物-无动物成分    MSCGS-acf
5 ml    间充质干细胞软骨细胞分化生长添加物    MCDS
10 ml    胎牛血清    FBS
25 ml    胎牛血清    FBS
100 ml    */EDTA消化液    T/E
100 ml    *中和液    TNS
100 ml     非酶细胞裂解液    NECDS
50 ml    细胞冻存液    CFM
50 ml    无血清细胞冻存液    SF-CFM
50 ml    台盼蓝    TB
500 ml    磷酸盐缓冲注    DPBS
500 ml    *    HBSS
1 ml    多聚赖氨酸 1 mg/ml    PLL
1 ml    多聚赖氨酸10 mg/ml    PLL
500 ml    胎牛血清    FBS
5 ml    */*溶液    P/S
100 ml    */*溶液    P/S
50 ml    抗真菌溶液    AMS
50 ml    抗霉菌溶液    ABAMS
500 ml    细胞培养超纯水    CCGW
100 ml    肌细胞分离液    MDS
25 mg    牛脑垂体提取物    BPE
100 mg    牛脑垂体提取物    BPE
10 ml    胰岛素铁硒传递蛋白 100x    ITS
100 ml    非必需氨基酸 100X    NEAA
1mg    纤维粘连蛋白-牛源    BPF
48 tests/48 well plate    I 型胶原细胞检测试剂盒    Col
48 tests/48 well plate    纤维母细胞粘附检测试剂盒    Fibro
1000 tests/96 well plate    MTT细胞活力和增殖检测试剂盒    MTT原化细胞

 


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