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小鼠杂交瘤细胞;3D10培养

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所  在  地上海

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更新时间:2017-02-13 15:57:31浏览次数:194次

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产品简介

小鼠杂交瘤细胞;3D10培养细胞一般2-3天更换一次培养基,这取决于细胞生长的速度。许多细胞培养实验室通常在周一,周三,周五更换培养基。

详细介绍

【温馨提示】细胞用途:只可用于科研,不可用于临床诊断和治疗

细胞名称  小鼠杂交瘤细胞;3D10培养
形态特性   淋巴母细胞样
生长特性  半贴壁生长
特征特性   可产生单克隆抗体。 
培养条件   RPMI 1640 (w/o Hepes)  10%FBS
传代方法   1:3传代,2-3天传一代
传代情况  C25
冻存条件   基础培养基+5%DMSO+20%FBS
支原体检测  阴性
STR  
同工酶  
染色体  
使用权限  A类

产品名称小鼠杂交瘤细胞;3D10培养
货期3-5天
发货地上海

复苏操作要点: 
1)将培养基在37℃水浴锅预热;准备一个15mL无菌的离心管,加入8mL预热培养基。 
2)将冻存细胞从液氮罐中取出,快速放入37℃水浴锅中复温(可准备一洁净的烧杯,装满37℃的水,细胞冻存管取出后迅速放入烧杯内,再逐步转移到水浴锅中)。轻轻晃动冻存管,使细胞能在1~2min内*解冻,使细胞能尽快通过zui易受损的温度段(-5~0℃)。注意冻存管管口不能没入水中,BIU-87(人膀胱癌细胞)避免引起污染。 
3)用75%酒精擦拭冻存管后再置于超净台内,将管内细胞转移至准备好的离心管内,轻轻吹打液体,使细胞均匀分散,降低DMSO浓度,吹打时避免产生气泡。用新鲜培养基洗管壁2次,均转移至离心管内。 
4)800rpm离心5min,弃上清,加入新鲜的培养基,吹打制成细胞悬液。 
5)将细胞悬液转移至T25细胞瓶内,补加适量的培养基,轻轻晃动细胞瓶使细胞分布均匀,放入温箱内培养。 
6)第二天观察细胞贴壁生长情况,换新鲜培养基以去除死细胞。继续培养,待细胞长至80~90%汇合
操作步骤:
1. 将无菌的盖玻片置于细胞培养皿中,将细胞悬液接种于培养皿中进行细胞爬片,待细胞长至80%时取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次,4%的多聚甲醛固定爬片15min,再次用PBS浸洗玻片3次,每次3min。
3. 0.5% Triton X-100(PBS配制)室温孵育爬片20min,使细胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻断内源性过氧化物酶,室温孵育15min(一般用甲醇或蒸馏水稀释30%过氧化氢),PBS冲洗3次,每次3min。
5. 封闭血清室温孵育20min,PBS冲洗3次,每次3min。
6. 细胞特异性一抗孵育:按照抗体说明书稀释比例稀释好一抗,滴加在爬片上,于4°C湿盒中孵育一夜,PBS冲洗3次,每次3min。
7. 二抗孵育:选与一抗对应的二抗,按比例稀释后滴加在爬片上,37°C湿盒中孵育30min,PBS冲洗3次,每次3min。
8. 将爬片周围水渍吸干,爬片上滴加新鲜配制的DAB显色液,显微镜下观察,当出现棕黄色或棕褐色的阳性信号时用蒸馏水冲洗终止显色。
9. 复染:用Harris苏木素复染30s~1min,水洗后用1%的盐酸酒精分化,再用蒸馏水(或PBS)水洗返蓝。
10. 封片:将中性树胶滴在爬片一侧,再用盖玻片盖上,先放平盖玻片一侧再轻轻放下另一侧,以免产生气泡,封好的爬片平放置于通风厨中晾干。
11. 镜检观察。
豚鼠基质金属蛋白酶9(MMP-9)免疫试剂盒    guinea pig matrix metalloproteinase 9,MMP-9 ELISA Kit
豚鼠黄体激素(LH)免疫试剂盒    Guinea Pig Luteinizing Hormone,LH ELISA Kit
豚鼠*(cAMP)免疫试剂盒    Guinea pig cyclic adenosine monophosphate,cAMP ELISA Kit
豚鼠环磷酸鸟苷(cGMP)免疫试剂盒    Guinea pig Cyclic guanosine monophosphate,cGMP ELISA Kit
豚鼠过氧化脂质/乳过氧化物酶(LPO)免疫试剂盒    Guinea Pig lipid peroxlde,LPO ELISA Kit
豚鼠钩端螺旋体IgG(Leptospira)免疫试剂盒    Guinea pig Leptospira IgG ELISA Kit
豚鼠催产素(OT)免疫试剂盒    Guinea Pig Oxytocin,OT ELISA Kit
豚鼠促肾上腺皮质激素(ACTH)免疫试剂盒    Guinea Pig adrenocorticotropic hormone,ACTH ELISA kit
豚鼠促卵泡素(FSH)免疫试剂盒    guinea pig follicle-stimulating hormone,FSH ELISA Kit-乙酰-L-*    shēng huà shì jì    容量:        25克
N-乙酰-L-苯*    shēng huà shì jì    容量:        100克
N-乙酰-L-半*    shēng huà shì jì    容量:        1公斤
N-乙酰-D-*    shēng huà shì jì    容量:        100克
N-乙酰-D-*    shēng huà shì jì    容量:        1公斤
n-辛基-β-D-吡喃葡萄糖苷    shēng huà shì jì    容量:        1公斤
N-三(羟甲基)甲基*    shēng huà shì jì    容量:        20次/200ul/支
N-三(羟甲基)甲基-3-氨基丙磺酸钠盐    shēng huà shì jì    容量:    保存:-20℃    50次/300ul/支
N-三(羟甲基)甲基-3-氨基丙磺酸    shēng huà shì jì    容量:    保存:-20℃    50次/300ul/支
N-三(羟甲基)甲基-2-氨基乙磺酸钠盐    shēng huà shì jì    容量:    保存:-20℃    50次/300ul/支
N-三(羟甲基)甲基-2-氨基乙磺酸    shēng huà shì jì    容量:    保存:-20℃    50次/300ul/支
N-三(羟甲基)甲氨酸-2-羟基丙磺酸钠盐    shēng huà shì jì    容量:    保存:-20℃    50次/300ul/支

 

 

 


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