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小鼠杂交瘤细胞株;GP73-5B4-G6-C9-C6-G4使用说明书

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更新时间:2017-02-08 10:42:31浏览次数:474次

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产品简介

小鼠杂交瘤细胞株;GP73-5B4-G6-C9-C6-G4使用说明书细胞一般2-3天更换一次培养基,这取决于细胞生长的速度。许多细胞培养实验室通常在周一,周三,周五更换培养基。

详细介绍

【温馨提示】细胞用途:只可用于科研,不可用于临床诊断和治疗

产品名称小鼠杂交瘤细胞株;GP73-5B4-G6-C9-C6-G4使用说明书
货期3-5天
发货地上海

细胞名称  小鼠杂交瘤细胞株;GP73-5B4-G6-C9-C6-G4使用说明书
形态特性   淋巴母细胞样
生长特性  悬浮生长
特征特性   该细胞属保藏,其特征特性尚未公开。 
培养条件   MEM-EBSS: Minimum Essential Medium (MEM Eagles with Earle's Balanced Salts)  10%FBS
传代方法   1:3传代,3-4天传1次
传代情况  C5
冻存条件   基础培养基+5%DMSO+20%FBS
支原体检测  阴性
STR  
同工酶  
染色体  
使用权限  未定

复苏操作要点: 
1)将培养基在37℃水浴锅预热;准备一个15mL无菌的离心管,加入8mL预热培养基。 
2)将冻存细胞从液氮罐中取出,快速放入37℃水浴锅中复温(可准备一洁净的烧杯,装满37℃的水,细胞冻存管取出后迅速放入烧杯内,再逐步转移到水浴锅中)。轻轻晃动冻存管,使细胞能在1~2min内*解冻,使细胞能尽快通过zui易受损的温度段(-5~0℃)。注意冻存管管口不能没入水中,BIU-87(人膀胱癌细胞)避免引起污染。 
3)用75%酒精擦拭冻存管后再置于超净台内,将管内细胞转移至准备好的离心管内,轻轻吹打液体,使细胞均匀分散,降低DMSO浓度,吹打时避免产生气泡。用新鲜培养基洗管壁2次,均转移至离心管内。 
4)800rpm离心5min,弃上清,加入新鲜的培养基,吹打制成细胞悬液。 
5)将细胞悬液转移至T25细胞瓶内,补加适量的培养基,轻轻晃动细胞瓶使细胞分布均匀,放入温箱内培养。 
6)第二天观察细胞贴壁生长情况,换新鲜培养基以去除死细胞。继续培养,待细胞长至80~90%汇合
操作步骤:
1. 将无菌的盖玻片置于细胞培养皿中,将细胞悬液接种于培养皿中进行细胞爬片,待细胞长至80%时取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次,4%的多聚甲醛固定爬片15min,再次用PBS浸洗玻片3次,每次3min。
3. 0.5% Triton X-100(PBS配制)室温孵育爬片20min,使细胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻断内源性过氧化物酶,室温孵育15min(一般用甲醇或蒸馏水稀释30%过氧化氢),PBS冲洗3次,每次3min。
5. 封闭血清室温孵育20min,PBS冲洗3次,每次3min。
6. 细胞特异性一抗孵育:按照抗体说明书稀释比例稀释好一抗,滴加在爬片上,于4°C湿盒中孵育一夜,PBS冲洗3次,每次3min。
7. 二抗孵育:选与一抗对应的二抗,按比例稀释后滴加在爬片上,37°C湿盒中孵育30min,PBS冲洗3次,每次3min。
8. 将爬片周围水渍吸干,爬片上滴加新鲜配制的DAB显色液,显微镜下观察,当出现棕黄色或棕褐色的阳性信号时用蒸馏水冲洗终止显色。
9. 复染:用Harris苏木素复染30s~1min,水洗后用1%的盐酸酒精分化,再用蒸馏水(或PBS)水洗返蓝。
10. 封片:将中性树胶滴在爬片一侧,再用盖玻片盖上,先放平盖玻片一侧再轻轻放下另一侧,以免产生气泡,封好的爬片平放置于通风厨中晾干。
11. 镜检观察。
山羊胞外超氧化物歧化酶[Cu-Zn](SOD3)ELISA Kit    ,英文名:    Goat Extracellular superoxide dismutase[Cu-Zn](SOD3)ELISA kit    ,规格:    48T/96T
山羊白介素8(IL-8/CXCL8)ELISA Kit    ,英文名:    Goat Interleukin-8,IL-8 ELISA Kit    ,规格:    48T/96T
山羊γ干扰素(IFN-γ)ELISA Kit    ,英文名:    Goat Interferon γ ,IFN-γ ELISA Kit    ,规格:    48T/96T
山羊β-脂蛋白(β-LP)ELISA Kit    ,英文名:    Goat beta-lipotropin,β-LP ELISA Kit    ,规格:    48T/96T
山羊α1酸性糖蛋白(α1-AGP)ELISA Kit    ,英文名:    Goat α1-Acid glycoprotein,α1-AGP ELISA Kit    ,规格:    48T/96T
山羊toll样受体2(TLR2)ELISA Kit    ,英文名:    Goat toll-like receptor 2,TLR2 ELISA kit    ,规格:    48T/96T
山羊M型肌酸激酶(CKM)ELISA Kit    ,英文名:    Goat Creatine kinase M-type,CKM ELISA kit    ,规格:    48T/96T
山羊C型钠尿肽(CNP)ELISA Kit    ,英文名:    Goat C-type natriuretic peptide,CNP ELISA Kit    ,规格:    48T/96T
山羊C反应蛋白(CRP)ELISA Kit    ,英文名:    Goat C-reactive protein,CRP ELISA Kit    ,规格:    48T/96T
山羊CD14分子(CDl4)ELISA Kit    ,英文名:    Goat cluster Of differentiation,CDl4 ELISA Kit    ,规格:    48T/96TSPZ    硫氮杂蒽    5克    AR,95%
Pyruvic acid    乙酰甲酸    50毫克    高纯,99%
Pyrosine B    藻红    500克    ACS
Pyronin Y    派洛宁G    1克    高纯,98%
Pyronin B    吡罗红B    100毫克    BR,98%
Pyrogallic acid    焦酚    1克    BR
Pyrocatechol violet    儿茶酚紫    5克    IND,85%
Pyrocatechol    儿茶酚    100毫克    超纯,98%
Pyrimidine    间(二)氮苯    25克    BR,98%
Pyridoxamine 2HCL    吡哆胺    100克    IND
Pyridoxal hydrochloride    吡哆醛盐酸盐    25克    AR

 

 


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