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上海抚生实业有限公司
杂交瘤细胞;G2C51A2培养细胞一般2-3天更换一次培养基,这取决于细胞生长的速度。许多细胞培养实验室通常在周一,周三,周五更换培养基。
【温馨提示】细胞用途:只可用于科研,不可用于临床诊断和治疗。
细胞名称 杂交瘤细胞;G2C51A2培养
形态特性 淋巴母细胞样
生长特性 半贴壁生长
特征特性 该细胞属保藏,其特征特性尚未公开。
培养条件 RPMI 1640 (w/o Hepes) 10%FBS
传代方法 1:3传代,3-4天传1次
传代情况 C3
冻存条件 基础培养基+5%DMSO+20%FBS
支原体检测 阴性
STR
同工酶
染色体
使用权限 未定
产品名称 | 杂交瘤细胞;G2C51A2培养 |
货期 | 3-5天 |
发货地 | 上海 |
复苏操作要点:
1)将培养基在37℃水浴锅预热;准备一个15mL无菌的离心管,加入8mL预热培养基。
2)将冻存细胞从液氮罐中取出,快速放入37℃水浴锅中复温(可准备一洁净的烧杯,装满37℃的水,细胞冻存管取出后迅速放入烧杯内,再逐步转移到水浴锅中)。轻轻晃动冻存管,使细胞能在1~2min内*解冻,使细胞能尽快通过zui易受损的温度段(-5~0℃)。注意冻存管管口不能没入水中,BIU-87(人膀胱癌细胞)避免引起污染。
3)用75%酒精擦拭冻存管后再置于超净台内,将管内细胞转移至准备好的离心管内,轻轻吹打液体,使细胞均匀分散,降低DMSO浓度,吹打时避免产生气泡。用新鲜培养基洗管壁2次,均转移至离心管内。
4)800rpm离心5min,弃上清,加入新鲜的培养基,吹打制成细胞悬液。
5)将细胞悬液转移至T25细胞瓶内,补加适量的培养基,轻轻晃动细胞瓶使细胞分布均匀,放入温箱内培养。
6)第二天观察细胞贴壁生长情况,换新鲜培养基以去除死细胞。继续培养,待细胞长至80~90%汇合
操作步骤:
1. 将无菌的盖玻片置于细胞培养皿中,将细胞悬液接种于培养皿中进行细胞爬片,待细胞长至80%时取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次,4%的多聚甲醛固定爬片15min,再次用PBS浸洗玻片3次,每次3min。
3. 0.5% Triton X-100(PBS配制)室温孵育爬片20min,使细胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻断内源性过氧化物酶,室温孵育15min(一般用甲醇或蒸馏水稀释30%过氧化氢),PBS冲洗3次,每次3min。
5. 封闭血清室温孵育20min,PBS冲洗3次,每次3min。
6. 细胞特异性一抗孵育:按照抗体说明书稀释比例稀释好一抗,滴加在爬片上,于4°C湿盒中孵育一夜,PBS冲洗3次,每次3min。
7. 二抗孵育:选与一抗对应的二抗,按比例稀释后滴加在爬片上,37°C湿盒中孵育30min,PBS冲洗3次,每次3min。
8. 将爬片周围水渍吸干,爬片上滴加新鲜配制的DAB显色液,显微镜下观察,当出现棕黄色或棕褐色的阳性信号时用蒸馏水冲洗终止显色。
9. 复染:用Harris苏木素复染30s~1min,水洗后用1%的盐酸酒精分化,再用蒸馏水(或PBS)水洗返蓝。
10. 封片:将中性树胶滴在爬片一侧,再用盖玻片盖上,先放平盖玻片一侧再轻轻放下另一侧,以免产生气泡,封好的爬片平放置于通风厨中晾干。
11. 镜检观察。
lf4 (Kruppel likefactor 4) 肠道内富含的Kruppel样因子抗原
phospho-KLF5/Krueppel-like factor 5 (pSer272) 磷酸化肠道内富含的Kruppel样因子5抗原
LIF peptide 白血病抑制因子抗原
Matriptase 蛋白裂解酶(一种新的癌基因)抗原
HCMV UL49(Human Cytomegalovirus UL49 Gene) 人巨细胞病毒UL49抗原
MC-1R (melanocortin-1-receptor) 黑皮质素-1受体抗原
Mcl-1(myeloid cell leukemia 1) peptide 髓样细胞白血病-1抗原
MDR1(multidrug resistance 1) 多药耐药蛋白抗原
MEF2(myocyte enhancer-binding factor 2) 肌细胞增强因子2抗原
Mfn1 (Mitofusin1) 线粒体融合蛋白1西乌头Aconitum bulleyanum Crassicauline A 粗茎甲 79592-91-9 C35H49NO10 ≥98%
一文钱Stephania delavayi Crebanine 克班宁 25127-29-1 C20H21NO4 ≥95%
夏雪银线蕨Pteris cretica Creticoside C 大叶凤尾蕨甙C 53452-34-9 C26H44O8 ≥95%
刺桐Erythrina arborescens Cristacarpin 刺桐酚素 74515-47-2 C21H22O5 ≥95%
番红花 Crocus sativus L. Crocin I 西红花苷I; 94238-00-3 C44H64O24 ≥98%
番红花 Crocus sativus L. Crocin II 西红花苷Ⅱ 55750-84-0 C38H54O19 ≥98%
甜瓜Cucumis melo L. Cucurbitacin A * A 6040-19-3 C32H46O9 ≥98%
甜瓜 Cucumis melo LINN Cucurbitacin B * B 6199-67-3 C32H46O8 ≥98%
葫芦Cucurbitaceae Cucurbitacin D * D 3877-86-9 C30H44O7 ≥98%
葫芦Cucurbitaceae Cucurbitacin E * E 18444-66-1 C32H44O8 ≥98%
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