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小鼠髓性白血病淋巴细胞;M-NFS-60使用说明书

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所  在  地上海市

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更新时间:2017-01-24 13:17:51浏览次数:374次

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产品简介

小鼠髓性白血病淋巴细胞;M-NFS-60使用说明书细胞一般2-3天更换一次培养基,这取决于细胞生长的速度。许多细胞培养实验室通常在周一,周三,周五更换培养基。

详细介绍

【温馨提示】细胞用途:只可用于科研,不可用于临床诊断和治疗

产品名称小鼠髓性白血病淋巴细胞;M-NFS-60使用说明书
货期3-5天
发货地上海

细胞名称  小鼠髓性白血病淋巴细胞;M-NFS-60使用说明书
形态特性   淋巴母细胞样
生长特性  悬浮
特征特性   该细胞对IL-13和M-CSF有应答。 
培养条件    10%FBS
传代方法   5.0E+04cells/ml
传代情况  PN4
冻存条件   90%FBS+10%DMSO
支原体检测  培养法(-)
STR  
同工酶  
染色体  
使用权限  A类

复苏操作要点: 
1)将培养基在37℃水浴锅预热;准备一个15mL无菌的离心管,加入8mL预热培养基。 
2)将冻存细胞从液氮罐中取出,快速放入37℃水浴锅中复温(可准备一洁净的烧杯,装满37℃的水,细胞冻存管取出后迅速放入烧杯内,再逐步转移到水浴锅中)。轻轻晃动冻存管,使细胞能在1~2min内*解冻,使细胞能尽快通过zui易受损的温度段(-5~0℃)。注意冻存管管口不能没入水中,BIU-87(人膀胱癌细胞)避免引起污染。 
3)用75%酒精擦拭冻存管后再置于超净台内,将管内细胞转移至准备好的离心管内,轻轻吹打液体,使细胞均匀分散,降低DMSO浓度,吹打时避免产生气泡。用新鲜培养基洗管壁2次,均转移至离心管内。 
4)800rpm离心5min,弃上清,加入新鲜的培养基,吹打制成细胞悬液。 
5)将细胞悬液转移至T25细胞瓶内,补加适量的培养基,轻轻晃动细胞瓶使细胞分布均匀,放入温箱内培养。 
6)第二天观察细胞贴壁生长情况,换新鲜培养基以去除死细胞。继续培养,待细胞长至80~90%汇合时正常传代。一般刚复苏的细胞需经过2~3次传代,细胞活力恢复后才能进行后续的实验。
操作步骤:
1. 将无菌的盖玻片置于细胞培养皿中,将细胞悬液接种于培养皿中进行细胞爬片,待细胞长至80%时取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次,4%的多聚甲醛固定爬片15min,再次用PBS浸洗玻片3次,每次3min。
3. 0.5% Triton X-100(PBS配制)室温孵育爬片20min,使细胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻断内源性过氧化物酶,室温孵育15min(一般用甲醇或蒸馏水稀释30%过氧化氢),PBS冲洗3次,每次3min。
5. 封闭血清室温孵育20min,PBS冲洗3次,每次3min。
6. 细胞特异性一抗孵育:按照抗体说明书稀释比例稀释好一抗,滴加在爬片上,于4°C湿盒中孵育一夜,PBS冲洗3次,每次3min。
7. 二抗孵育:选与一抗对应的二抗,按比例稀释后滴加在爬片上,37°C湿盒中孵育30min,PBS冲洗3次,每次3min。
8. 将爬片周围水渍吸干,爬片上滴加新鲜配制的DAB显色液,显微镜下观察,当出现棕黄色或棕褐色的阳性信号时用蒸馏水冲洗终止显色。
9. 复染:用Harris苏木素复染30s~1min,水洗后用1%的盐酸酒精分化,再用蒸馏水(或PBS)水洗返蓝。
10. 封片:将中性树胶滴在爬片一侧,再用盖玻片盖上,先放平盖玻片一侧再轻轻放下另一侧,以免产生气泡,封好的爬片平放置于通风厨中晾干。
11. 镜检观察。
BP4    G蛋白结合蛋白4抗体
GBP6    G蛋白结合蛋白6体
GCAP1    鸟苷酸环化酶激活蛋白1抗体
GCAP2    鸟苷酸环化酶激活蛋白2抗体
GCAP3    鸟苷酸环化酶激活蛋白3抗体
GCAT    氨基丙酮合成酶抗体
GCC1    高尔基体卷曲螺旋蛋白1抗体
GCC2    高尔基体卷曲螺旋蛋白2抗体
GCDH    戊二酰*脱氢酶抗体
GCHFR    GTP环反馈调节蛋白抗体
GCM2    绒毛膜特异转录因子GCM2抗体
Gcn1l1    广泛控制氨基酸合成1样蛋白1抗体
GCNT2    β1-6 N-乙酰氨基葡萄糖转移酶2抗体布鲁氏菌培养基    250g    用于布鲁氏菌分离培养
Brucella Agar        
布鲁氏菌培养基抑菌剂    1ml*5    每支添加于200ml HB0315-1中
水稻水培养液    250g    用于水稻的水培养液
水稻赤霉菌培养基    250g    用于水稻中赤霉菌培养
FWA淡水鱼类琼脂培养基    250g    用于淡水鱼类肠道内细菌检测
BG11培养基    250g    用于蓝藻细菌培养
BG11 Medium        
ISP培养基    250g    用于链霉菌的培养
ISP Medium        
芽孢杆菌培养基    250g    用于芽孢杆菌平板计数
Bacillus Megatherium Medium        

 

 


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