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BALB/c 小鼠胚胎细胞;BALB/c 3T3 clone A31培养

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所  在  地上海

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更新时间:2017-01-24 13:15:25浏览次数:247次

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产品简介

BALB/c 小鼠胚胎细胞;BALB/c 3T3 clone A31培养细胞一般2-3天更换一次培养基,这取决于细胞生长的速度。许多细胞培养实验室通常在周一,周三,周五更换培养基。

详细介绍

【温馨提示】细胞用途:只可用于科研,不可用于临床诊断和治疗

细胞名称  BALB/c 小鼠胚胎细胞;BALB/c 3T3 clone A31培养
形态特性   成纤维细胞样
生长特性  贴壁生长
特征特性   该细胞来自14-17天的Balb/c小鼠胚胎,对单纯疱疹和人脊髓灰质炎病毒1敏感。 
培养条件   DMEM-H: Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose)  10%FBS
传代方法   3 to 5 X 10(5) cells/60mm plate,每周换液2次
传代情况  P67
冻存条件   基础培养基+5%DMSO+20%FBS
支原体检测  
STR  
同工酶  
染色体  
使用权限  A类

产品名称BALB/c 小鼠胚胎细胞;BALB/c 3T3 clone A31培养
货期3-5天
发货地上海

复苏操作要点: 
1)将培养基在37℃水浴锅预热;准备一个15mL无菌的离心管,加入8mL预热培养基。 
2)将冻存细胞从液氮罐中取出,快速放入37℃水浴锅中复温(可准备一洁净的烧杯,装满37℃的水,细胞冻存管取出后迅速放入烧杯内,再逐步转移到水浴锅中)。轻轻晃动冻存管,使细胞能在1~2min内*解冻,使细胞能尽快通过zui易受损的温度段(-5~0℃)。注意冻存管管口不能没入水中,BIU-87(人膀胱癌细胞)避免引起污染。 
3)用75%酒精擦拭冻存管后再置于超净台内,将管内细胞转移至准备好的离心管内,轻轻吹打液体,使细胞均匀分散,降低DMSO浓度,吹打时避免产生气泡。用新鲜培养基洗管壁2次,均转移至离心管内。 
4)800rpm离心5min,弃上清,加入新鲜的培养基,吹打制成细胞悬液。 
5)将细胞悬液转移至T25细胞瓶内,补加适量的培养基,轻轻晃动细胞瓶使细胞分布均匀,放入温箱内培养。 
6)第二天观察细胞贴壁生长情况,换新鲜培养基以去除死细胞。继续培养,待细胞长至80~90%汇合
操作步骤:
1. 将无菌的盖玻片置于细胞培养皿中,将细胞悬液接种于培养皿中进行细胞爬片,待细胞长至80%时取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次,4%的多聚甲醛固定爬片15min,再次用PBS浸洗玻片3次,每次3min。
3. 0.5% Triton X-100(PBS配制)室温孵育爬片20min,使细胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻断内源性过氧化物酶,室温孵育15min(一般用甲醇或蒸馏水稀释30%过氧化氢),PBS冲洗3次,每次3min。
5. 封闭血清室温孵育20min,PBS冲洗3次,每次3min。
6. 细胞特异性一抗孵育:按照抗体说明书稀释比例稀释好一抗,滴加在爬片上,于4°C湿盒中孵育一夜,PBS冲洗3次,每次3min。
7. 二抗孵育:选与一抗对应的二抗,按比例稀释后滴加在爬片上,37°C湿盒中孵育30min,PBS冲洗3次,每次3min。
8. 将爬片周围水渍吸干,爬片上滴加新鲜配制的DAB显色液,显微镜下观察,当出现棕黄色或棕褐色的阳性信号时用蒸馏水冲洗终止显色。
9. 复染:用Harris苏木素复染30s~1min,水洗后用1%的盐酸酒精分化,再用蒸馏水(或PBS)水洗返蓝。
10. 封片:将中性树胶滴在爬片一侧,再用盖玻片盖上,先放平盖玻片一侧再轻轻放下另一侧,以免产生气泡,封好的爬片平放置于通风厨中晾干。
11. 镜检观察。
GDPD1    甘油磷酸二酯酶磷酸结构域4抗体
GFPT2    D-果糖6磷酸转移酶2抗体
GABPA    GA结合蛋白转录因子α/GABP-α抗体
GABPB2    GA结合蛋白转录因子β/GABP-β1/GABP-β2抗体
GAD65 + GAD67    *脱羧酶65+*脱羧酶67抗体
GADL1    *脱羧酶样蛋白1抗体
G6PC3    葡萄糖-6-磷酸酶3/G6Pase-β抗体
GAA    α葡萄糖苷酶/溶酶体α-葡糖苷酶抗体
GAB3    生长因子受体结合蛋白2相关蛋白3抗体
GAB4    生长因子受体结合蛋白2相关蛋白4抗体
GABA A receptor pi    G氨基丁酸受体pi/GABAA Rπ抗体
phospho-GABBR2 (Ser884)    磷酸化G氨基丁酸B型受体2抗体
GNA11    G蛋白偶联受体结合蛋白α11/Gα 11 抗体
G3BP2    G3BP2蛋白抗体
GABA Transporter 2    γ氨基丁酸运载蛋白2抗体
GCNT3    β1-6 N-乙酰氨基葡萄糖转移酶3抗体Tryptose Soya Agar        
类杆菌-胆汁-七叶苷(BBE)琼脂    250g    用于脆弱拟杆菌群的分离培养
BBE Agar        
脆弱拟杆菌活化培养基肉汤    250g    用于脆弱拟杆菌活化培养
Bacteroides Phage Recovery Medium Broth        
*肉汤    250g    用于游泳池中假单胞菌检测
Arginine broth        
固体培养基    250g    用于细菌、纤维分解菌、真菌计数培养
Solid medium        
液体培养基    250g    用于甲烷菌计数培养
Liquid medium        
布氏杆菌种子培养基    250g    用于布氏杆菌菌种复活、传代
克氏琼脂    250g    用于铜绿假单胞菌的克氏试验

 

 

 


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